细粒棘球绦虫组织蛋白酶B的重组表达及生物信息学分析

发布时间：2017-10-24 14:40

  本文关键词：细粒棘球绦虫组织蛋白酶B的重组表达及生物信息学分析

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【摘要】：目的克隆、表达细粒棘球绦虫组织蛋白酶B(Eg Cat B)基因,并对其进行生物信息学预测和分析。方法提取细粒棘球绦虫总RNA反转录成c DNA,以此为模板扩增目的基因。利用无缝克隆技术和麦胚无细胞表达体系克隆表达Eg Cat B,用免疫印迹实验进行验证。采用Signal P 4.1、TMHMM sever v.2.0、Target P 1.1对Eg Cat B编码蛋白分别进行信号肽、跨膜区及亚细胞定位的预测。采用BLASTP和Gene Doc进行Eg Cat B同源序列比对及保守位点分析。采用Prot Param、SMART、Predictprotein、Swiss-model分析Eg Cat B编码蛋白的结构。采用Net OGlyc 4.0 Server和Net NGlyc 1.0 Server在线分析Eg Cat B蛋白O型和N型糖基化位点。结果成功构建了重组质粒p EU-Eg Cat B。蛋白电泳和免疫印迹实验结果显示该基因获得了可溶性表达。经生物信息学分析预测该蛋白分子量35.9 k Da、理论等电点6.37,为含信号肽的分泌蛋白,酶活性位点高度保守,并通过Gln106、Cys112、His282和Asn302形成了催化中心。Eg Cat B基因所编码蛋白氨基酸序列中不存在N-糖基化位点,但存在9个O-糖基化位点。结论成功克隆表达了细粒棘球绦虫Eg Cat B基因并对其进行了较全面的生物信息学预测分析,为该蛋白的功能研究提供了参考依据。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室 世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心;内蒙古民族大学蒙医药学院;
【关键词】： 细粒棘球绦虫 组织蛋白酶B 无缝克隆 无细胞体系 生物信息学
【基金】：国家自然科学基金(81201315) 中国疾病预防控制中心青年基金(2013A103) 上海市卫生局科研课题(20124174) 上海市自然科学基金(13ZR1462800)
【分类号】：R383.33
【正文快照】： tion for further functional study of the Eg Cat B protein.囊型包虫病(Cyst echinococcosis,CE)是由细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)的幼虫(棘球蚴)寄生于人、畜体内所引起的危害严重的人兽共患寄生虫病,是世界包虫病的主要疾病负担[1]。我国囊型包虫病流行区主要

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本文编号：1089235