人源性抗前列腺特异性膜抗原单链抗体的基因构建、表达及鉴定

发布时间：2017-10-25 07:19

  本文关键词：人源性抗前列腺特异性膜抗原单链抗体的基因构建、表达及鉴定

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【摘要】：目的:分别构建人源性抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体(sc Fv)/鱼精蛋白截短体(tp)、sc Fv/弗林蛋白酶识别位点(Fdt)/流感病毒融合肽结构域(HA2)/tp融合蛋白基因。利用原核表达体系表达、纯化并检测sc Fv、sc Fv-tp、sc Fv-Fdt-HA2-tp融合蛋白的活性。方法:采用PCR的方法,扩增融合基因sc Fv、sc Fv-tp、sc Fv-Fdt-HA2-tp,将获得的基因克隆入原核表达载体p ET28,在大肠杆菌BL21中表达,表达产物经SDS-PAGE和Western印迹鉴定,通过Ni2+-NTA螯合层析纯化。ELISA分析融合蛋白抗原亲和活性。结果:成功构建了人源性抗PSMA融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达。表达的目的蛋白均能与PSMA抗原结合。结论:融合蛋白具有结合抗原的活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础。
【作者单位】： 解放军323医院泌尿外科;第四军医大学唐都医院泌尿外科;西安交通大学第二附属医院药剂科;第四军医大学西京医院泌尿外科;第四军医大学免疫教研室;
【关键词】： 前列腺特异性膜抗原 单链抗体 融合蛋白 靶向输送
【基金】：国家自然科学基金(30973000)~~
【分类号】：R392.1
【正文快照】： Supported by a grant from National Natural Science Foundation of China(30973000).Correspondence to:SU Yan-sheng,email:suys2006@163.comReceived:March 12,2014;accepted:August 26,2014单链抗体(single-chain variable fragment,sc Fv)是将免疫球蛋白的重链可变区(V

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本文编号：1092663