全人源scFv-Fc真核表达载体的构建与鉴定

发布时间：2017-10-25 17:12

  本文关键词：全人源scFv-Fc真核表达载体的构建与鉴定

  更多相关文章： scFv-Fc CHO细胞 真核表达 IL-

【摘要】：目的:构建全人源抗IL-33 scFv-Fc重组载体,转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO),表达并鉴定融合抗体蛋白。方法:RT-PCR扩增人IgG1 Fc段并插入真核表达载体pcDNA3.1中,构建pcDNA3.1/Fc重组载体;将合成的信号肽(SP)序列插入重组质粒pcDNA3.1/Fc,构建重组pcDNA3.1/SP-Fc通用载体;最后将本实验室前期筛选的抗IL-33 scFv插入重组质粒pcDNA3.1/SP-Fc中,构建重组pcDNA3.1/SP-scFv-Fc载体,测序正确后转染CHO细胞。RT-PCR、Western blot检测目的基因的转录及表达。结果:重组质粒测序结果表明成功地构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小为1 560 bp左右。转染CHO细胞后,RT-PCR结果显示目的基因在CHO细胞中成功转录,Western blot显示表达的蛋白可以和羊抗人IgG1 Fc抗血清发生特异性免疫反应。结论:成功构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,以便于后续在CHO细胞中表达。
【作者单位】： 泸州医学院基础医学院;
【关键词】： scFv-Fc CHO细胞 真核表达 IL-
【基金】：国家自然科学基金(31000415) 四川省青年基金(2012JQ0018) 泸州市科技局项目(13ZB0262)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： IL-33是IL-1家族的新成员,广泛表达于多种组织,高表达于胃、肺、脊髓、脑和皮肤,参与宿主防御、免疫调节与炎症反应[1]。IL-33可诱导表达IL-4、IL-5以及IL-13从而在黏膜组织中引起严重的病理改变。本实验室前期通过噬菌体展示技术筛选了全人源抗IL-33的单链抗体(single-chain

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王e，

本文编号：1094682