中东呼吸综合征冠状病毒假病毒系统的建立及其在中和抗体检测中的应用

发布时间：2017-10-28 01:16

  本文关键词：中东呼吸综合征冠状病毒假病毒系统的建立及其在中和抗体检测中的应用

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【摘要】：目的:为了避免中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)感染与中和试验中操作活病毒带来的生物安全隐患,构建只具有一次感染能力而无复制能力的MERS假病毒,建立MERS假病毒系统,并应用于中和抗体检测。方法:构建含有MERS-CoV S基因的重组质粒pcDNA3.1-MERS-S,与缺失Env基因、含有萤光素酶报告基因的HIV-1骨架质粒pNL4-3.Luc.RE共转染293T细胞,收获含有假病毒的上清;通过Western印迹、细胞感染实验和血清中和试验,确定是否包装出MERS假病毒,及是否能有效应用于细胞感染与中和试验。结果:MERS假病毒pMERS-S培养上清经Western印迹鉴定出相对分子质量为25×103的HIV-1 P24蛋白和相对分子质量为180×103的MERS-CoV S蛋白;与阴性对照假病毒pEnv-相比,pMERS-S能有效感染MERS-CoV敏感细胞系Huh-7,在感染细胞中产生荧光信号,感染细胞的假病毒量与产生的荧光信号呈明显的量效关系;在MERS假病毒中和试验中,pMERS-S能被MERS-CoV中和抗体中和而失去感染力,反映抗体对MERS-CoV的中和活性。结论:建立了不依赖于BSL-3高等级生物安全条件的MERS假病毒系统,并有效应用于中和抗体检测,为MERS-CoV疫苗、药物评价及病毒致病机制研究提供了良好的技术支撑手段。
【作者单位】： 山西医科大学微生物与免疫学教研室;军事医学科学院微生物流行病研究所 病原生物学国家重点实验室;
【关键词】： 中东呼吸综合征冠状病毒 S蛋白 假病毒 中和试验
【基金】：国家重点基础研究发展计划(2011CB504706)
【分类号】：R373.1
【正文快照】： 中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respira-tory syndrome coronavirus,MERS-CoV)是一种新型冠状病毒[1],它可以使感染者出现急性、严重呼吸道疾病,伴有发热、咳嗽、气短及呼吸困难,部分病例出现肾功能衰竭和死亡[2-3],是一种高致病性病毒。活病毒中和试验一直是检测血清

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