丙烯醛单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立

发布时间：2017-10-28 17:18

  本文关键词：丙烯醛单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立

  更多相关文章： 丙烯醛 完全抗原 单克隆抗体 间接竞争ELISA

【摘要】：目的利用丙烯醛阳性杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体,优化并建立丙烯醛的ELISA检测技术。方法采用直接人工合成法,将丙烯醛半抗原与载体耦合制备完全抗原(免疫原)。利用PEG法将免疫效价高的Balb/c小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用有限稀释法进行4次亚克隆,筛选得到1株能稳定分泌抗丙烯醛抗体的亚型为IgG2b的杂交瘤细胞株1G7G6,并制备腹水型抗体。在此基础上,优化并建立检测丙烯醛的间接竞争ELISA方法。结果合成适于免疫和ELISA检测的完全抗原丙烯醛-KLH(免疫原)和丙烯醛-BSA(包被原),制备的丙烯醛抗体(腹水)的效价均在8×104以上,与其他丙烯醛类似物交叉反应率均小于1%,特异性高。优化后丙烯醛ELISA方法的检测灵敏度(IC50)为43.2 ng/ml,检测线性范围为4.4~417.2 ng/ml,检测限(LOD)为1.8 ng/ml。结论成功制备得到高亲和力、高效价的丙烯醛腹水型单抗,筛选优化了间接竞争ELISA检测条件,建立了检测液相中丙烯醛的特异、快速、灵敏的ELISA检测技术。
【作者单位】： 暨南大学生物工程学系
【关键词】： 丙烯醛 完全抗原 单克隆抗体 间接竞争ELISA
【基金】：暨南大学自然科学基金(109057,640073)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 丙烯醛(Acrolein)为无色透明液体,易溶于水、乙醇等极性溶剂,具有很强的刺激性和催泪性。其分子结构中有C=C、HC=O 2个活性基团,可发生加合、氧化、还原及聚合反应等。丙烯醛属高毒性有机污染物,人类通过不同的途径接触丙烯醛,如食物(葡萄酒、啤酒、地沟油、酱油等)、燃烧物(

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 岱沁;周振荣;吕永峰;许凯峰;任先云;;富砷饮水对居民下肢血管的影响[J];中国地方病防治杂志;2008年04期

2 张萃;卢文菊;梅俪凡;黄超贤;李红枝;刘晓波;;抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备与鉴定[J];免疫学杂志;2013年04期

3 朱立军,戴亚;液相色谱法分析卷烟主流烟气中的挥发醛[J];烟草科技;2003年10期

4 刘兴余;朱茂祥;谢剑平;;丙烯醛致突变性研究进展[J];中国烟草学报;2009年03期

5 程学美;邵华;单永乐;张志虎;冯斌;汪莉君;;甲醛及丙烯醛对人淋巴细胞DNA分子加合作用的研究[J];中国卫生检验杂志;2007年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杨卫红;夏雅娟;;砷暴露对心血管系统的影响[J];环境与健康杂志;2011年08期

2 侯宏卫;熊巍;张小涛;范多清;者为;唐纲岭;胡清源;;丙烯醛生物标志物研究进展[J];环境与健康杂志;2011年08期

3 张萃;梅俪凡;卢文菊;刘晓波;黄超贤;李红枝;;检测瞬时受体电位通道6的ELISA双抗体夹心法的建立[J];免疫学杂志;2013年12期

4 李波;贾金明;;饮用水中有害离子检测分析仪设计[J];计算机测量与控制;2014年02期

5 胡立琼;曾敏;雷鸣;廖柏寒;周航;;含铁材料对污染水稻土中砷的稳定化效果[J];环境工程学报;2014年04期

6 黄云;王裔耿;缪明明;赵琦华;杨光宇;;快速分离柱高效液相色谱法测定卷烟主流烟气中的主要羰基化合物[J];色谱;2007年02期

7 丁时超;杜文;银董红;王诗太;钱晓春;;卷烟主流烟气中挥发性醛酮的LC-MS/MS分析[J];烟草科技;2008年09期

8 蒋腊梅;练文柳;丁时超;王f;钱晓春;谭海风;刘锋;;卷烟侧流烟气中有害醛酮类化合物的分析[J];烟草科技;2012年01期

9 徐海涛;吕健;闫向阳;王同蕾;童红武;姜福东;盛志艺;;色谱法分析卷烟烟气中羰基化合物[J];中国烟草学报;2009年06期

10 管敏娅;;酚试剂法测定不同场所空气中甲醛的方法探讨[J];中国卫生检验杂志;2007年07期

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 舒俊生;降低卷烟主流烟气中羰基化合物和一氧化氮研究[D];江南大学;2010年

2 李新娜;亚砷酸钠及保护剂对血管内皮细胞效应中microRNAs的作用研究[D];吉林大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 马海霞;急性羰基镍中毒对大鼠DNA加合物及损伤修复相关基因Chk1和Cdc25A表达的影响研究[D];兰州大学;2009年

2 廖予琦;卷烟主流烟气中部分成分在滤嘴中的截留效率研究[D];云南大学;2012年

3 左凤敏;三氧化二砷（As_2O_3）对大鼠睾丸支持细胞紧密连接及其相关蛋白的影响[D];遵义医学院;2013年

4 陈t，

本文编号：1109203