单纯疱疹病毒Ⅱ型gC2蛋白在CHO细胞中的表达、纯化及其免疫活性

发布时间：2017-10-30 00:01

  本文关键词：单纯疱疹病毒Ⅱ型gC2蛋白在CHO细胞中的表达、纯化及其免疫活性

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【摘要】：目的在CHO细胞中表达单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)Ⅱ型gC2蛋白,纯化后检测其免疫活性。方法利用ANTHEWIN等软件分析GenBank中HSVⅡ型gC2的氨基酸序列,筛选抗原表位富集、且亲水性较好的蛋白胞外区片段,选择真核和原核生物均偏爱的密码子,通过OptimumGene软件对基因进行序列优化,化学合成全新的基因序列HSV2-gC2,PCR扩增后,插入pMCE5载体,构建重组表达质粒pMCE5-gC2,转染至CHO细胞中进行真核表达。表达的重组gC2蛋白经亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将纯化的重组gC2蛋白分别于第0、2、4周经腹腔免疫小鼠,以免疫PBS作为对照,采用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平;酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测免疫小鼠脾淋巴细胞分泌IFNγ(代表Th1细胞因子)和IL-4(代表Th2细胞因子)的细胞频率。结果重组表达质粒pMCE5-gC2经菌落PCR、双酶切(EcoRⅠ/NotⅠ)及测序证实构建正确;纯化的重组gC2蛋白相对分子质量约为90 000,纯度约为85%,浓度为40μg/ml,可与小鼠抗His单克隆抗体特异性结合;通过3次免疫,小鼠产生了高水平的血清抗体,与免疫前相比,差异均有统计学意义(P0.001);免疫小鼠脾细胞经特异性抗原刺激后,分泌IFNγ和IL-4的细胞频率分别为(13.46±2.832)/106和(19.2±2.48)/106个细胞,均显著高于对照组(P0.001)。结论在CHO细胞中表达了重组gC2蛋白,纯化的蛋白能够激发小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,为进一步研制HSV亚单位疫苗奠定了基础。
【作者单位】： 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系;南京军区军事医学研究所;中国药科大学生命科学与技术学院;
【关键词】： 单纯疱疹病毒Ⅱ型 包膜蛋白C 中国仓鼠卵巢细胞 免疫活性
【基金】：国家863重大课题(2012AA02A405) 国家传染病重大专项(2013zx10004804-003) 国家重大新药创制课题(2014ZX09304314-003) 国家自然基金(81373109) 江苏省自然基金课题(BK2012526) 江苏省社会发展基金课题(BE2010603)资助
【分类号】：R373.11
【正文快照】： 单纯疱疹病毒(herpers simplex virus,HSV)属于疱疹病毒科α亚科,是人类感染的常见病毒之一。HSV根据血清型可分为Ⅰ型和Ⅱ型两种,其中,Ⅰ型主要通过口面部感染,也通过性传播[1],Ⅱ型主要通过性传播[2-3],其中HSVⅡ型可通过产道传染给新生儿,造成新生儿疱疹性脑膜炎[4],致新生

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本文编号：1115209