弓形虫微线体蛋白MIC2和M2AP真核表达载体的构建

发布时间：2017-10-30 05:02

  本文关键词：弓形虫微线体蛋白MIC2和M2AP真核表达载体的构建

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【摘要】：目的构建弓形虫RH株微线体蛋白M2AP和MIC2的真核表达载pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,为建立同时表达MIC2和M2AP蛋白的重组毕赤酵母表达系统,制备重组粘附蛋白复合体MIC2-M2AP奠定基础。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,用Oligo dT-Adaptor引物逆转录合成cDNA。根据已知的弓形虫mic2和m2ap基因序列,采用引物设计软件Primer premier5.0自行设计并合成引物,以cDNA为模板,PCR扩增mic2和m2ap基因,克隆入pMD-19-simple-T载体,经酶切和测序鉴定后回收目的片段,分别插入至pGAPZαA内,构建重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,转化入E.coli DH5α。提取转化菌质粒,进行酶切和测序鉴定。结果 PCR扩增得到的mic2和m2ap基因分别为2 200bp和1 000bp,与预期大小一致。T-A克隆重组质粒pMD19-T-mic2、pMD19-T-m2ap和重组酵母表达质粒pGAPZαA-mic2、pGAPZαA-m2ap经测序鉴定,与GenBank收录的弓形虫mic2基因和m2ap基因序列同源性为100%,重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap构建成功。结论成功构建弓形虫重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,为进一步研究MIC2和M2AP相互作用机制及其免疫保护效应奠定了基础。
【作者单位】： 温州医科大学基础医学院寄生虫学教研室;
【关键词】： 刚地弓形虫 MIC MAP 真核表达
【基金】：浙江省自然科学基金项目(No.Y2100971) 浙江省大学生科技创新活动计划项目(No.2013R413013) 温州医科大学本专科学生科研课题项目(No.wyx201201026)
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生虫,可寄生于包括人类在内的哺乳动物、爬行类和鸟类的所有有核细胞中,引起人兽共患弓形虫病。人感染弓形虫后多为隐性感染,但免疫缺陷病人及孕妇感染弓形虫后危害严重。目前治疗弓形虫病的药物疗效不理想,而弓形虫疫苗接种

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本文编号：1116200