MiR-142-3p对THP-1细胞释放炎症因子的调控作用

发布时间：2017-10-31 22:20

  本文关键词：miR-142-3p对THP-1细胞释放炎症因子的调控作用

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【摘要】：背景 脓毒症（sepsis）是指由细菌、病毒及寄生虫等微生物感染所引起的全身炎症反应综合征（SIRS），容易进展为感染性休克及多器官功能衰竭，预后差，病死率高达30%~50%。其发病机理是微生物入侵诱导的多种促炎介质释放，引起免疫功能失调。放大的炎症瀑布效应引起全身炎症因子释放失控，最终导致细胞损伤、凋亡和器官功能障碍。目前脓毒症治疗效果不佳而且费用异常昂贵。近20年来，研究人员针对脓毒症已知的发病机理尝试了多种治疗方法，如采用单克隆抗体中和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素1（IL-1）等细胞因子，然而临床试验发现这些生物疗法的临床疗效并不理想。目前研究重点已转向寻找上游调控途径，以期达到从源头控制体内炎症级联反应的目的，寻求脓毒症新的治疗方法。微小RNA（microRNA，miRNA）是一种内源性非编码RNA分子，，由21~25个核苷酸组成。miRNA通常靶向多个信使RNA（mRNA），通过翻译水平的抑制或断裂靶标mRNA而调节基因的表达。近年来的研究发现在脓毒症中，miRNA参与调控多种致炎基因的表达与抑制，从而影响炎症细胞的增殖、分化，炎症因子的产生、释放和受体的表达。在众多miRNAs中，研究提示miR-142-3p在脓毒症模型中变化明显，可能参与炎症调控反应，但具体作用机制尚不明确。 目的 1.明确miR-142-3p在THP-1细胞释放炎症因子过程中的作用。 2.为发现调控免疫细胞释放炎症因子的新途径提供实验依据。 内容与方法 1.培养实验细胞THP-1细胞株并传代；PI单染色法检测THP-1细胞存活率。 2.分别以低浓度（0.5μg/ml）及高浓度（2.0μg/ml）LPS诱导THP-1细胞24小时，应用ELISA法检测细胞培养液中TNF-α、IL-6和MCP-1的浓度。 3.在THP-1细胞中转染荧光RNA，通过荧光显微镜观察脂质体试剂（Lipofectamine IMAX）的转染效率。在THP-1细胞以100nM浓度转染miR-142-3p模拟物（mimic）和阻遏物（inhibitor），qRT-PCR法检测miR-142-3p含量。 4.过表达miR-142-3p对炎症因子释放的影响：在THP-1细胞转染miR-142-3pmimic（100nM）后培养48小时，ELISA法检测细胞培养液中TNF-α、IL-6和MCP-1的浓度。 5.抑制miR-142-3p表达对炎症因子释放的影响：(1)在THP-1细胞转染miR-142-3p inhibitor（100nM）后培养48小时；(2)在THP-1细胞转染miR-142-3p inhibitor（100nM）培养24小时后，加入0.5μg/ml及2.0μg/ml LPS诱导24小时，ELISA法检测以上细胞培养液中TNF-α、IL-6和MCP-1的浓度。 结果 1.两种浓度LPS诱导THP-1细胞后，炎症因子（TNF-α、IL-6和MCP-1）释放量均较对照组升高（P＜0.01），并表现出LPS浓度依赖性，高浓度组较低浓度组释放量增加，有统计学差异（TNF-α：P＜0.01；IL-6、MCP-1：P＜0.05）。 2.在转染100nM miR-142-3p mimic后，THP-1细胞内miR-142-3p含量较阴性对照组（NC组）增加（P＜0.05）；转染100nM miR-142-3p inhibitor后，miR-142-3p含量较inhibitor阴性对照组（INC组）下降，但差异无统计学意义（P＞0.05）。 3.过表达miR-142-3p后，细胞培养液中TNF-α、IL-6和MCP-1的水平较NC组增加，有统计学差异（TNF-α：P＜0.05；IL-6、MCP-1： P＜0.01）。 4.抑制miR-142-3p的表达后，细胞培养液中TNF-α、IL-6和MCP-1释放水平相对于INC组无明显变化（P＞0.05）。 5.抑制miR-142-3p的表达后再以两种浓度LPS诱导，低浓度组中细胞培养液IL-6释放量减少（P＜0.05）；高浓度组IL-6释放量的减少，没有统计学差异（P＞0.05）。在两组中，TNF-α、MCP-1释放量均略减少，但差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 1.内毒素脂多糖（LPS）能诱导THP-1细胞释放TNF-α、IL-6和MCP-1。 2.过表达miR-142-3p能促进THP-1细胞释放TNF-α、IL-6和MCP-1。 3.抑制THP-1细胞miR-142-3p的表达可减少LPS诱导的IL-6释放。
【关键词】：脂多糖 脓毒症 微小RNA 炎症因子 单核细胞
【学位授予单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 中英文缩略词表3-5
• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-15
• 材料与方法15-24
• 结果24-31
• 讨论31-36
• 结论36-37
• 参考文献37-41
• 综述41-50
• 参考文献47-50
• 附表50-51
• 附彩图51-52
• 致谢52-54

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本文编号：1124026