转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在紫杉醇诱导HeLa细胞周期阻滞中的作用及其机制

发布时间：2017-11-01 06:13

  本文关键词：转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在紫杉醇诱导HeLa细胞周期阻滞中的作用及其机制

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【摘要】：目的探讨转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)在紫杉醇诱导宫颈腺癌HeLa细胞周期阻滞中的作用及其分子机制。方法 MTT法确定紫杉醇的最佳浓度和处理时间;PCR技术构建pCI neo/CREB(PN)重组质粒及pCI neo/CREB-M(PM)定点突变质粒;流式细胞术检测细胞周期,Western blotting检测磷酸化CREB(pCREB)、CREB、cyclins以及CDKs蛋白表达。结果紫杉醇抑制HeLa细胞增殖的有效条件为0.1μmol/L处理24 h。0.1μmol/L紫杉醇诱导G2/M细胞数量增加,并呈时间依赖性;cyclin A表达量下调,cyclin B1、D1和pCREB表达量上调。此外,紫杉醇的处理对cyclin E、CDK1、CDK2、CDK4和CREB表达量并无显著性改变。然而,PM联合紫杉醇处理后显著性地反转了紫杉醇单独处理引起的cyclin A下调、cyclin B1和cyclin D1的上调,并且细胞周期G2/M期阻滞显著性减少。结论转录因子CREB介导的靶向细胞周期蛋白表达在紫杉醇诱导的细胞周期阻滞过程中扮演重要角色。
【作者单位】： 宁波大学医学院解剖学与组织学胚胎学系转化医学重点实验室;
【关键词】： 宫颈癌 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 细胞周期 流式细胞术 免疫印迹法
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81372209,81071653) 浙江省自然科学基金资助项目(LY13H160038)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 核内转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)的DNA序列,可调控靶基因的表达[1~4]。我们的前期研究结果表明,cAMP/PKC/MAPK信号通路调控CREB的磷酸化水平,进而影响凋亡基因Bcl-2的表达。为了深入研究CREB是否为调控Bcl-2的关键位点,

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本文编号：1125585