慢病毒介导的GFP转染对小鼠骨髓间充质干细胞表型、增殖和分化能力的影响

发布时间：2017-11-02 09:07

  本文关键词：慢病毒介导的GFP转染对小鼠骨髓间充质干细胞表型、增殖和分化能力的影响

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【摘要】：运用慢病毒(Lentivirus)载体构建绿色荧光蛋白(GFP)在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的转染体系,检测转染后MSCs的表型和增殖能力,并诱导其向成肌细胞分化,检测此转染体系对MSCs细胞表型、增殖和分化能力的影响.骨髓细胞悬液破红后贴壁法培养MSCs,采用流式细胞术鉴定细胞表面标记,鉴定MSCs纯度;Lentivirus-GFP以1、10、50和100的感染复数(MOI)转染MSCs,作用48h后流式细胞术及免疫荧光法检测转染效率和表达的荧光强度;MTT法检测转染后MSCs的细胞活力.诱导MSCs-GFP向成肌细胞分化,蛋白印记法(WB)检测成肌细胞特异性蛋白desmin和α-SMA的表达.流式细胞术检测结果显示,培养的MSCs表达CD44、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和CD188,符合干细胞特性.MOI为1、10、50和100的转染效率分别为23.45%、93.51%、95.44%和95.55%,MOI为10时,转染效率较高,且对MSCs活力无明显影响.MSCs-GFP体外经成肌细胞诱导分化后,表达特异性抗原desmin和α-SMA.表明本研究成功构建了小鼠骨髓来源MSCs的Lentivirus-GFP转染体系,有效标记了MSCs细胞,且此标记对MSCs的表型、增殖和分化能力等细胞生物学特性无明显影响.
【作者单位】： 南京大学医学院;江苏省疾病预防控制中心慢性传染病防制所;
【关键词】： 慢病毒(Lentivirus) 绿色荧光蛋白(GFP) 小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs) 转染 组织工程
【基金】：国家自然科学基金(81301448,81301448,3120040) 江苏省疾病预防控制中心重点人才项目(JKRC20110029)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 随着干细胞工程学的发展,骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)作为一种理想的组织修复来源,已受到越来越多的关注[1].MSCs是存在于骨髓中具有多向分化潜能的一类干细胞,具有低免疫原性和独特的免疫调节作用,能逃避免疫识别、抑制免疫应答[2],且具有取材简便、对机

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

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【共引文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 张英才;杨卿;汪国营;刘剑戎;许世磊;李晓华;程锦涛;张琪;杨扬;陈规划;;人脐带间充质干细胞对脂肪肝供肝肝移植大鼠保护作用的实验研究[J];中华肝脏外科手术学电子杂志;2013年05期

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5 周t，

本文编号：1130872