刚地弓形虫MIC8 CTD作用蛋白的筛选及鉴定

发布时间：2017-11-03 15:05

  本文关键词：刚地弓形虫MIC8 CTD作用蛋白的筛选及鉴定

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【摘要】：目的从刚地弓形虫速殖子裂解液中筛选并鉴定微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8CTD)的作用蛋白。方法分别以GST-MIC8CTD蛋白和GST蛋白(对照)作为探针蛋白,采用GST pull-down技术从弓形虫裂解液中筛选目标蛋白并进行SDS-PAGE分析;将目标蛋白转印至PVDF膜,测序,通过BLAST2在线对比搜索相似蛋白序列,初步确定目标蛋白;以目标蛋白抗体为一抗进行Western blot,分析GST pull-down产物与目标蛋白抗体的相互作用;分别用GSTMIC8CTD多克隆抗体和兔免疫前血清结合的sepharose与弓形虫裂解液进行免疫共沉淀试验,沉淀物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 PAGE显示GST-MIC8CTD蛋白的pull-down产物中有一蛋白条带(分子质量单位约35~45ku),GST蛋白的pull-down产物中无此蛋白;BLAST2比对目标蛋白的氨基酸序列与弓形虫醛缩酶序列一致;ECM检测GST-MIC8CTD多克隆抗体的免疫共沉淀产物中有蛋白组分可被相应的抗体识别,免疫前血清的免疫共沉淀产物中无可被识别的蛋白。结论经GST pull-down技术和免疫共沉淀试验筛选、鉴定,弓形虫MIC8CTD的作用蛋白为醛缩酶。
【作者单位】： 新乡医学院寄生虫学教研室;新乡医学院药理学教研室;中山大学中山医学院寄生虫学教研室;
【基金】：河南省科技攻关计划项目(No.112102310209) 河南省教育厅自然科学研究项目(No.2012B310019) 新乡医学院博士科研启动基金项目(No.2010)
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)简称弓形虫,为专性细胞内寄生原虫,可入侵多种动物的有核细胞,导致弓形虫感染或弓形虫病。在美国和法国,弓形虫已成为继沙门氏菌(Salmonella)和李斯特菌(Liste-***ria)后第3大食源性致死性病原体[1]。微线体蛋白(microneme protein,MIC)在虫体入

【参考文献】

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本文编号：1136691