稳定表达CRFR1的HEK293细胞株建立与功能鉴定

发布时间：2017-11-04 13:29

  本文关键词：稳定表达CRFR1的HEK293细胞株建立与功能鉴定

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【摘要】：目的建立稳定表达CRFR1的HEK293细胞株,并鉴定cAMP评价体系构建是否成功。方法采用Lipofectamine2000将CRFR1质粒转染至HEK293细胞中,经G418筛选单克隆阳性细胞,采用Western blot技术、RT-PCR法、免疫荧光法证实稳定表达CRFR1细胞株构建成功。并用CRF刺激稳定表达CRFR1的HEK293细胞株,绘制CRF刺激HEK293-CRFR1细胞释放cAMP的量效曲线。结果 Western blot、RT-PCR、免疫荧光结果表明,CRFR1受体在HEK293细胞系中成功表达。cAMP释放量效实验显示,CRF刺激HEK293-CRFR1细胞释放cAMP的EC50为(5.64±0.05)×10-10mol·L-1。结论成功建立了稳定表达CRFR1的HEK293细胞株,并且cAMP含量评价体系构建成功,为研究CRFR1的生物学功能及筛选CRFR1受体靶向药物奠定了基础。
【作者单位】： 中南大学药学院;军事医学科学院毒物药物研究所;
【基金】：国家科技部“重大新药创制”科技重大专项(No2012ZX09301003-001) 国家自然科学基金资助项目(No31350001)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin re-leasing factor,CRF)是由41个氨基酸组成的多肽,是应激条件下的主要神经递质,在下丘脑室旁核表达量较高,并在边缘结构广泛分布[1]。CRF负责调节自主神经、免疫、生理等与应激相关的反应。CRF主要是通过与其受体结合来发挥作用,CRF

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本文编号：1139642