NRF-1基因真核慢病毒表达载体的构建及表达

发布时间：2017-11-07 22:09

  本文关键词：NRF-1基因真核慢病毒表达载体的构建及表达

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【摘要】：目的:构建核呼吸因子-1(NRF-1)基因慢病毒表达载体并包装成重组慢病毒颗粒,感染大鼠心肌细胞H9c2(2-1)后,筛选出稳定上调表达NRF-1的大鼠心肌细胞H9c2(2-1)。方法:利用lipofectAMINE 2000试剂将pLenti6.3-NRF1-IRES2-EGFP质粒与两种包装质粒在293T细胞中包装成重组慢病毒,收集病毒并测定滴度。用重组慢病毒感染大鼠心肌细胞H9c2(2-1),然后用杀稻瘟素(blasticidin)筛选转染阳性细胞。用PCR法鉴定靶细胞基因组中NRF-1基因序列,用QPCR测定转染阳性靶细胞中NRF-1基因表达量。结果:收集的重组慢病毒滴度为5.5×107TU/ml。转染阳性靶细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光。PCR结果显示,慢病毒携带NRF-1基因序列已插入靶细胞基因组。QPCR结果显示,转染阳性靶细胞中NRF-1基因的表达量是对照组的2.25倍。结论:本研究成功地构建NRF-1基因重组慢病毒表达载体,并在大鼠心肌细胞H9c2(2-1)中表达,为进一步上调NRF-1基因表达后心肌细胞能量代谢的研究提供了实验支持,并为心力衰竭能量代谢的基因治疗奠定了基础。
【作者单位】： 中国人民解放军第五医院重症医学科;宁夏医科大学检验学院;宁夏回族自治区医学科学研究所宁夏医科大学医学科学技术研究中心;
【基金】：宁夏回族自治区自然科学基金项目资助(NZ03680) 国家自然科学基金项目资助(81360042)
【分类号】：R346
【正文快照】： 心力衰竭(HF)是心血管疾病终末阶段。伴随世界人口老龄化加快,其发病率逐年增高。患者的人身健康及生活质量严重受损。近年研究发现HF发病机制复杂,涉及多个方面,较多研究表明,心肌能量代谢紊乱是其中较为重要的原因[1,2],但目前药物治疗的作用有限。NRF-1(nuclear respirator

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本文编号：1154304