mTOR信号通路在iPS定向分化RPE细胞中的调控机制研究

发布时间：2017-11-08 10:10

  本文关键词：mTOR信号通路在iPS定向分化RPE细胞中的调控机制研究

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【摘要】：目的探讨mTOR信号通路在iPS定向分化RPE细胞中的调控机制。方法培养iPS细胞,悬浮培养后形成拟胚体EB,诱导分化为RPE细胞。通过免疫细胞化学的方法,观察iPS-RPE细胞分化一个月后特异性蛋白(RPE65、LRAT、zo-1)的表达。同时通过Q-PCR,Western Blotting的方法检测iPS-RPE在不同分化时间点(分化1个月、2个月、3个月)上,iPS-RPE细胞中特异性基因、蛋白的表达变化以及mTOR信号通路的活性。最后应用雷帕霉素抑制iPS-RPE细胞中mTOR的通路,进一步观察iPS-RPE细胞中的蛋白表达变化。Q-PCR采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)进行组间比较。结果荧光显微镜观察到iPS-RPE细胞在分化1个月时,表达RPE65、LRAT、zo-1蛋白。与对照组iPS比较,Q-PCR结果显示,实验组RPE65在分化1个月,2个月,3个月时的表达量分别为0.84±0.13,4.8±1.1,20.3±4.9(P=0.000);Best1分化1个月,2个月,3个月时的表达量分别为1.5±0.16,2.3±0.68,11.78±1.57(P=0.000);MerTK在分化1个月,2个月,3个月时的表达量分别为4.12±1.94,1.87±0.76,15.53±1.33(P=0.000),CK18分化1个月,2个月,3个月时的表达量分别为2.4±0.63,2.3±0.37,9.67±1.44(P=0.000),Western Blotting结果也表明,随着分化时间延长,iPS-RPE细胞中特异性蛋白(BEST1、catenin、MerTK)表达量有显著提高,而mTOR信号通路的活性受到抑制。与对照组(加DMSO)比较,雷帕霉素处理获得的iPS-RPE细胞中BEST1、MerTK、ck18蛋白表达量上升不是很明显,catenin蛋白显著提高。结论建立了体外高等分化、功能高效的iPS-RPE细胞,随iPS-RPE细胞分化时间延长,mTOR信号通路的活性是逐步抑制的。
【作者单位】： 南京医科大学第一附属医院眼科实验室;
【基金】：眼科学国家重点实验室开放课题(2013KF02) 江苏省科教兴卫工程重点人才基金(RC201149)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： RPE细胞是神经视网膜外侧的一层单层终末分化的细胞,当RPE细胞中表达的基因(RPE65、RLBP1、LRAT等)存在先天突变,引起RPE功能障碍时,会引起各种遗传性视网膜变性疾病[1-2]。诱导多功能干细胞(inducedpluripotent stem cell,iPS)将成为细胞移植的一个重要来源,iPS可以无限期地

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5 白杨;夏伟;叶哲伟;曾甫清;;精原细胞分化过程中c-kit mRNA和蛋白的表达[J];华中科技大学学报(医学版);2008年05期

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7 赵磊;曲强;卫金花;何小东;;肝细胞分化过程中肝细胞极化分子的表达与调节[J];山西医科大学学报;2010年06期

8 李祺福,汪德耀;高尔基体在人胃腺癌细胞诱导分化过程中的变化[J];实验生物学报;1989年01期

9 李怡,娄淑杰,路长林;神经干细胞分化研究进展[J];中国神经科学杂志;2001年03期

10 陈东风,杜少辉,李伊为,黎晖;骨形成蛋白4诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力(英文)[J];中国临床康复;2004年01期

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1 贺新强;崔克明;;植物次生木质部细胞分化过程中的细胞编程死亡和次生壁构建[A];中国植物学会植物结构与生殖生物学专业委员会、江苏省植物学会2007年学术年会学术报告及研究论文集[C];2007年

2 梁凤霞;丁明孝;翟中和;;膀胱上皮细胞的生物学特征及其与细胞分化的关系[A];第八次全国电子显微学会议论文摘要集（Ⅰ）[C];1994年

3 张映璜;简志英;;ABA对烟草叶片细胞分化和脱分化的影响[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

4 徐小平;唐力军;高毅;;体外诱导人骨髓来源的多能成体祖细胞向肝样细胞分化的实验研究[A];第二届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2005年

5 江幸山;吴鸿;;调控拟南芥果实开裂的结构及其细胞分化[A];广东省植物学会学术研讨会论文集[C];2007年

6 江幸山;吴鸿;;调控拟南芥果实开裂的结构及其细胞分化[A];广东省植物学会第十六期学术研讨会论文集[C];2007年

7 吴英杰;陈大为;刘佳利;罗昊澍;崔胜;;17β-雌激素通过不同机制剂量依赖性的促进鸡胚垂体细胞增殖和促性腺激素细胞分化[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年

8 王哲;黄高f;;用cDNA消减杂交法克隆白血病K562细胞分化相关基因[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展（上册）[C];2001年

9 崔克明;;植物的细胞分化和龄[A];西部地区第二届植物科学与开发学术讨论会论文摘要集[C];2001年

10 司聚同;邢录洲;孙红;陈德高;王永潮;;I_D基因:一个广谱性细胞分化抑制基因[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

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1 陈超;科学家发现引发细胞分化的分子通道[N];科技日报;2010年

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5 记者张孟军;不同干细胞拥有共同基因[N];科技日报;2002年

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7 刘霞;美首次获得濒危物种的干细胞[N];科技日报;2011年

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