直接免疫荧光法检测狂犬病病毒滴度条件的优化及验证

发布时间：2017-11-11 02:30

  本文关键词：直接免疫荧光法检测狂犬病病毒滴度条件的优化及验证

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【摘要】：目的对直接免疫荧光法检测狂犬病病毒(rabies virus,RV)滴度的条件进行优化及验证。方法考察直接免疫荧光法中细胞不同接种方式(分步接种法、一步接种法)、病毒不同培养温度(34、37℃)及培养时间(6、12、24、48、72、96 h)对狂犬病病毒滴度的影响;对优化的方法进行试验间精密性和特异性验证,并与小鼠脑内滴定法的检测结果进行比较。结果选择一步接种法作为直接免疫荧光法的细胞接种方式;34℃作为病毒培养温度;病毒培养至96 h时进行染色,判定实验结果;病毒培养至第3天时进行荧光灶计数,计算病毒液中病毒的数量。两名操作人员12次检测结果的变异系数仅为0.05%;用该方法检测不同病毒,仅狂犬病病毒组出现特异性荧光,而犬瘟热病毒和犬细小病毒组未观察到荧光灶。采用直接免疫荧光法和小鼠脑内滴定法检测狂犬病病毒样品的病毒滴度结果差异无统计学意义(P0.05),具有较好的一致性。结论优化的直接免疫荧光法精密性良好,特异性强,操作简便,检测周期短,可用于狂犬病病毒滴度的定量检测。
【作者单位】： 长春百克生物科技股份公司;吉林大学生命科学学院艾滋病疫苗国家工程实验室;
【基金】：国家科技部十二五重大科技专项(2012ZX10001-009)
【分类号】：R373.9;R392-33
【正文快照】： 在狂犬病疫苗生产及研究中,国内一直沿用小鼠法测定狂犬病病毒(rabies virus,RV)培养液感染性滴度,由于该方法检测周期长,操作复杂,实验动物个体差异大,人为干扰因素较多,实验重复性欠佳,因此,建立一种简便、有效、重复性好的体外检测方法十分必要。免疫荧光法由Goldwasser于1

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本文编号：1169454