高致病性2型猪链球菌截短型类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶基因的鉴定和功能研究
发布时间：2017-11-12 09:37
本文关键词：高致病性2型猪链球菌截短型类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶基因的鉴定和功能研究
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【摘要】：【目的】克隆表达高致病性2型猪链球菌05ZYH33株的SspA截短型基因,验证其是否具有酶学活性,并构建该基因的缺失突变株细菌,探讨其在2型猪链球菌致病过程中所起的作用【。方法】构建SS2的SspA截短型基因05SSU0811原核表达质粒,表达并纯化05SSU0811蛋白,运用丝氨酸蛋白酶底物Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide(pNa),通过显色反应检测表达产物的酶学活性;运用同源重组技术敲除05SSU0811基因,多重交叉PCR筛选敲除株并测序鉴定,动物试验分析05SSU0811基因缺失对细菌毒力的影响。【结果】成功表达并纯化05SSU0811蛋白,浓度约为3.5 g/L。丝氨酸蛋白酶活性测定试验证实其具有酶学活性;获得05SSU0811基因缺失突变株,小鼠攻毒试验表明,野生株攻毒的20只小鼠全部死亡,基因缺失突变株攻毒组死亡9只,死亡率45%,两组间死亡率有显著性差异。表明05SSU0811基因缺失的菌株毒力较野生株明显下降。【结论】05SSU0811基因编码的截短型丝氨酸蛋白酶仍然具有酶学活性,SS2的截短型基因SspA在高致病性2型猪链球菌的致病性方面具有一定作用。
【作者单位】： 第三军医大学基础部微生物学教研室;
【基金】：国家自然科学基金青年科学基金项目(No.81301398) 全军医学科技青年培育项目(No.13QNP106)
【分类号】：R378;S852.61
【正文快照】： 丝氨酸蛋白酶是一类以丝氨酸为活性中心的蛋白水解酶,主要分为6个蛋白超家族,其中类胰蛋白酶和类枯草杆菌蛋白酶是其最主要的成员。类枯草杆菌蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶S8家族,广泛存在于细菌、真菌和寄生虫等病原生物中[1-3]。在细菌中,类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶(Surface-associa
【共引文献】
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本文编号：1175362
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