刚地弓形虫自噬相关蛋白3基因的克隆表达与多抗制备

发布时间：2017-11-13 18:36

  本文关键词：刚地弓形虫自噬相关蛋白3基因的克隆表达与多抗制备

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【摘要】：目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)自噬相关蛋白3(Tg Atg3)基因,并制备能特异性识别该蛋白的多克隆抗体。方法以弓形虫RH株c DNA为模板,构建p ET28a-Tg Atg3重组质粒,转化入大肠埃希菌(E.coli)Rosetta感受态细胞,经自诱导培养基诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化诱导表达产物,以小鼠抗His标签单克隆抗体作为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)进行鉴定。以纯化的Tg Atg3蛋白作为抗原皮下多点注射免疫日本大耳白兔,125μg/(只·次),免疫4次后心脏取血,制备血清,获得特异性抗Tg Atg3多克隆抗体。对制备的多克隆抗体进行Western blotting与间接免疫荧光法(IFA)鉴定。结果双酶切、PCR扩增及测序结果证实目的片段序列正确,原核表达质粒p ET28a-Tg Atg3构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果表明,重组E.coli中可见相对分子质量(Mr)约44 000的可溶性Tg Atg3蛋白的高效表达。抗体检测Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的Tg Atg3蛋白。IFA结果显示,该多克隆抗体可与虫体胞浆内Tg Atg3结合。结论获得重组可溶性Tg Atg3蛋白,制备的多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的天然Atg3蛋白。
【作者单位】： 东阳市人民医院检验科;温州医科大学基础医学院;温州医科大学第一临床医学院;温州医科大学生命科学学院检验医学院;
【基金】：浙江省自然科学基金(No.LY12H19004,LQ14H190003) 浙江省科技厅公益性项目(No.2014C33161) 浙江省新苗人才计划(No.2014R413082)~~
【分类号】：R382.5
【正文快照】： (1 Clinical Laboratory,Dongyang People’s Hospital,Jinhua 322100,China;2 School of Basic MedicalSciences,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325035,China;3 The First Clinical Medical College,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325035,China;4 School of Medi

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王南宁;谭玉珍;王海杰;;营养缺乏对自由生活阿米巴自噬的影响[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2010年06期

2 谭峰;华倩倩;李星潘;李相志;梁韶晖;;刚地弓形虫自噬相关蛋白8(TgAtg8)多克隆抗体制备及初步应用[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2014年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 秦兴发;张华;漆洪波;陈国庆;马海霞;;缺氧诱导滋养细胞自噬参与子痫前期发病的实验研究[J];重庆医学;2014年05期

2 田丽娟;魏凤菊;高翔;赵甜甜;刘刚;侯春燕;王冬梅;;拟南芥AtATG8c基因缺失突变体的鉴定及其对非生物胁迫的响应[J];河北农业大学学报;2014年05期

3 岳爱梅;刘营;谭叶;丛慧;林佳慧;张英杰;张忠广;;自生阿米巴和纤毛虫的分离培养与观察[J];热带医学杂志;2013年02期

4 陈恒余;孙军;;自噬的新分支:内质网自噬[J];华中科技大学学报(医学版);2013年04期

5 贺强;漆正堂;丁树哲;;参与自噬的相关蛋白质的翻译后修饰[J];中国生物化学与分子生物学报;2013年09期

6 谭峰;华倩倩;李星潘;李相志;梁韶晖;;刚地弓形虫自噬相关蛋白8(TgAtg8)多克隆抗体制备及初步应用[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2014年02期

7 Paola Maycotte;Andrew Thorburn;;Targeting autophagy in breast cancer[J];World Journal of Clinical Oncology;2014年03期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 杨爱民;Neuronostatin对痛觉、胃肠运动和情绪的影响及脂基化蛋白LC3-Ⅱ的半合成[D];兰州大学;2013年

2 张伟;NO/cGMP信号通路在新生和未成熟雌性大鼠卵泡形成和发育中的生物学作用及其调控机制研究[D];南京农业大学;2011年

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本文编号：1181914