乙型脑炎病毒PrM蛋白原核表达及单克隆抗体制备

发布时间：2017-11-14 10:09

  本文关键词：乙型脑炎病毒PrM蛋白原核表达及单克隆抗体制备

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【摘要】：目的表达和纯化乙型脑炎病毒Pr M基因的融合蛋白,制备Pr M融合蛋白的鼠源性单克隆抗体(p Ab)。方法根据Gen Bank数据库中乙型脑炎病毒Pr M氨基酸序列获得其对应的基因序列,对Pr M全长基因(80 aa)进行体外合成,将其克隆至p ET-21原核表达载体,构建重组表达质粒p ET21-Pr M;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,通过镍离子亲和层析纯化目的蛋白;纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,获取单克隆抗体并利用Protein A Sepharose柱进行纯化,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果成功构建了p ET-21-Pr M原核表达载体,0.5 mmol/L PTG 30℃培养6 h,原核蛋白Pr M蛋白以包涵体形式在大肠杆菌得到高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的Pr M蛋白,蛋白浓度为600 mg/L,制备的抗Pr M单抗效价高达1:1.6×106,Western blot鉴定其具有良好的特异性。结论获得高纯度乙型脑炎病毒Pr M蛋白,并制备特异性单克隆抗体,将为进一步研究乙型脑炎病毒的生物学功能提供实验基础。
【作者单位】： 湖南省人民医院检验科;湖南省疾病预防控制中心;
【基金】：湖南省科学技术厅科研条件创新专项项目(No:2011TT2046)
【分类号】：R373
【正文快照】： 乙脑(Japanese encephalitis,JE)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)经蚊虫传播引起人或动物中枢神经系统感染的急性传染病,病死率在10%以上。我国发患者数占世界总发患者数的80%,幸存者约15.3%,有不同程度的脑膜炎后遗症[1]。近年来,其流行范围有不断扩

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 郭杨;郭万柱;;流行性乙型脑炎病毒及其研究进展[J];预防医学情报杂志;2008年01期

2 汤德元,郭万柱;日本脑炎病毒及其疫苗的研究[J];中国兽医学报;2005年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张宁;金洪涛;夏志平;张瑞岩;刘雯;李勇;薛慧亮;李丹;丁壮;;日本脑炎病毒囊膜蛋白的基因原核表达及抗原性分析[J];动物医学进展;2010年06期

2 许丽娟;朱朝敏;;流行性乙型脑炎病毒基因结构的研究进展[J];国际检验医学杂志;2011年18期

3 许乐燕;徐闻青;;乙型脑炎病毒及疫苗研究进展[J];国际生物制品学杂志;2006年06期

4 张宁;金洪涛;丁壮;张瑞岩;刘雯;李勇;连海;夏志平;;流行性乙型脑炎多克隆抗体的制备及其囊膜E蛋白ELISA方法的建立[J];黑龙江畜牧兽医;2010年19期

5 颜浩;张宏刚;陈苏红;王升启;;我国免疫规划病种病原体保护性抗原研究进展[J];军事医学;2011年01期

6 张中;杨厚安;段小卫;布日古德;;流行性乙型脑炎的防控[J];畜牧与饲料科学;2010年Z2期

7 刘珊;黄莺;俞炜源;;乙型脑炎疫苗研究进展[J];生物技术通讯;2009年05期

8 常志顺;徐健;汤德元;李春燕;;日本脑炎基因工程疫苗的研究进展[J];猪业科学;2008年06期

9 汤德元;徐健;曾智勇;黄涛;李春燕;李佳蔚;;乙型脑炎病毒分离株PrM/E基因测序和SA14、SA14-14-2的序列比较[J];猪业科学;2008年12期

10 杨世银;蔡雨函;徐志文;;流行性乙型脑炎的研究概况[J];猪业科学;2014年04期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 高淑霞;猪常见病毒病诊断基因芯片的构建与初步应用[D];山东农业大学;2006年

2 刘珊;基于日本脑炎病毒复制子载体系统的疫苗研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年

3 王（韦华）;猪源乙型脑炎病毒SXBJ07株全长基因组克隆分析及ELISA检测方法的建立[D];西北农林科技大学;2009年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈伯权,王树惠,孙月英,范瑞莲,李泽林,吴美英,孟庆荣,刘琴芝,吴美英,孟庆荣,刘琴芝;利用单克隆抗体对乙型脑炎病毒不同毒株抗原分析的研究[J];病毒学报;1985年04期

2 王祥,陈焕春,何启盖,吴斌,贾杏林,吴美洲;乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS1基因片段的克隆、测序与表达[J];病毒学报;2001年03期

3 王文玲,陆柔剑,陆振华,王世峰,付士红,邓瑶,李仁清,辛伟,梁国栋,阮力;流行性乙型脑炎病毒GSS株prM、E和NS1蛋白基因的克隆及在非复制型痘苗病毒中的表达[J];病毒学报;2003年03期

4 黄莺,贾丽丽,孙志伟,王志伟,俞炜源,俞永新;流行性乙型脑炎病毒(JEV)全长感染性克隆的制备及恢复病毒的获得[J];病毒学报;2003年04期

5 娄元梅，刘启富，，朱德钟，蹇锐;乙型脑炎重组痘苗病毒的抗原表达及其免疫保护性[J];病毒学报;1995年04期

6 王祥,陈焕春;JEV分子生物学与新型疫苗研究进展[J];动物医学进展;2001年03期

7 张彦平;冯子健;CK.Lee;;中国流行性乙型脑炎防制策略[J];河南预防医学杂志;2006年04期

8 谢艺红,莫兆军,陈敏玫,周开姣,李艳萍,杨进业,冯向阳;一起流行性乙型脑炎暴发疫情的流行病学调查分析[J];疾病监测;2005年04期

9 景晓,宫学诗,张世水;模糊数学综合评判法在乙型脑炎传播媒介筛选中的应用[J];中国热带医学;2004年04期

10 李玉华,胁田隆,保井孝太郎;流行性乙型脑炎病毒E蛋白上与病原性相关的氨基酸[J];中国生物制品学杂志;2002年01期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 梅匀安;袁庄川;韩秀杰;赵凡凡;王晓杜;;日本脑炎病毒prM蛋白的表达及免疫原性分析[J];畜牧与兽医;2014年09期

本文编号：1184950