基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原ELISA法的建立及现场初步应用

发布时间：2017-11-14 12:30

  本文关键词：基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原ELISA法的建立及现场初步应用

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【摘要】：目的建立基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并对其应用情况进行初步评价。方法采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western blotting)对A1E3及B1C4单克隆抗体进行特性分析,用ELISA法测定B1C4、A1E3单克隆抗体效价。采用棋盘格滴定法确定双单抗夹心ELISA法检测循环抗原的最佳工作浓度。在最佳条件下,分别检测20份急性血吸虫病病人血清、46份慢性血吸虫病病人血清及20份正常人血清,评价其检测敏感性和特异性。用建立的双单抗夹心ELISA法和市售检测血吸虫循环抗原的ELISA试剂盒检测湖北省江陵县IHA阳性血吸虫病病人血清72份,以评估双单抗夹心ELISA法的检测效能。结果经SDS-PAGE和Western blotting分析,纯化后的A1E3及B1C4在相对分子质量(Mr)88 000和52 000处各有一条清晰重链,在Mr20 000处有一条相同的轻链,且A1E3及B1C4可与可溶性虫卵抗原(SEA)及急性血吸虫病病人血清发生特异性反应。B1C4单抗效价可达1∶105,A1E3单抗效价可达1∶30 000。用B1C4、A1E3双单抗夹心ELISA法检测急、慢性血吸虫病病人血清阳性率分别为100%和86.9%,检测20份正常人血清特异性为100%。双单抗夹心ELISA法及市售ELISA试剂盒检测日本血吸虫循环抗原阳性率分别为45.8%及43.1%。结论成功建立了基于A1E3及B1C4双单抗夹心ELISA法,该法检测日本血吸虫循环抗原具有较高的敏感性及特异性。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室 世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心;
【基金】：国家重大科技专项(2008ZX10004011、2012ZX10004220)
【分类号】：R383.24
【正文快照】： 循环抗原是血吸虫在宿主体内寄生的代谢产物中具有抗原性的大分子物质[1]。近年来,大量研究阐明了血吸虫循环抗原的主要成分、理化性质及代谢途径,表明了检出循环抗原是血吸虫活虫寄生的标志。因此,血吸虫循环抗原检测具有诊断及考核疗效的价值,是一种具有病原学意义的免疫诊

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本文编号：1185422