BCSC-1基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

发布时间：2017-11-17 18:15

  本文关键词：BCSC-1基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

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【摘要】：目的构建BCSC-1基因慢病毒RNA干扰载体并感染人乳腺癌细胞MCF-7,实时荧光定量PCR(QPCR)检测干扰效果。方法 设计并合成两条针对人BCSC-1基因的干扰序列(BCSC-1 shRNA1和BCSC-1shRNA2)以及对照序列(NS),将其连接入载体PLKO.1-sp6-pgk-GFP中,得到两个干扰载体和一个阴性对照载体。通过菌落PCR、双酶切和DNA序列测定等方法对其进行鉴定。将干扰载体与辅助包装质粒Lipofectamine2000共转染HEK293T细胞包装慢病毒并收取病毒上清。所获慢病毒颗粒感染人乳腺癌细胞MCF-7,QPCR方法检测两种干扰载体对BCSC-1基因的抑制效率。结果 菌落PCR结果显示目的片段插入PLKO.1-sp6-pgk-GFP载体,DNA测序证实插入序列无误。QPCR结果显示两种干扰载体感染人乳腺癌细胞MCF-7后,BCSC-1 shRNA1组和BCSC-1 shRNA2组BCSC-1基因表达水平分别为0.34±0.046和0.63±0.043,较空白对照组和NS组均有明显下降(P0.05),且BCSC-1 shRNA1抑制效果优于BCSC-1 shRNA2(P0.05)。结论 成功构建了两种BCSC-1基因慢病毒干扰载体,两载体均能下调人乳腺癌细胞MCF-7中BCSC-1基因表达水平。
【作者单位】： 潍坊医学院免疫学教研室;
【基金】：山东省自然科学基金项目(课题编号:2009CM019)
【分类号】：R392
【正文快照】： 乳腺癌候选抑制蛋白-1(Breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)基因位于人类染色体llq23~ q24。多种肿瘤细胞转染BCSC-1基因后,肿瘤细胞的 体内外恶性生物学行为,如体内外增殖能力、转移能 力、成瘤性等均明显下降[1—3],803(:-1基因可能为一个新的重要抑癌基因。本研

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1 袁芳;鞠吉雨;唐媛媛;邸大琳;王丽娜;孙萍;;BCSC-1基因异位表达对人小细胞肺癌细胞增殖的抑制效应[J];中国癌症杂志;2012年05期

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本文编号：1196918