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NFκB核定位基序增强超声微泡介导的外源基因转染效率

发布时间:2017-11-20 01:28

  本文关键词:NFκB核定位基序增强超声微泡介导的外源基因转染效率


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【摘要】:目的评价NFκB核定位基序增强超声靶向微泡破坏(UTMD)介导的外源基因转染效率的价值。方法构建人基质细胞衍生因子1α(phSDF-1α)质粒(phSDF-1α组),并插入NFκB核定位基序,构建具有核输入功能的目的基因质粒phSDF-1α-NFκB(phSDF-1α-NFκB)。用Cy3核酸染料标记两种质粒后在优化的UTMD条件下分别转染人脐静脉血管内皮细胞。CCK-8检测细胞存活率,流式细胞仪和荧光显微镜分别检测质粒的入胞效率和入核效率,RT-PCR和ELISA检测SDF-1α基因和蛋白表达水平。比较两种质粒的入核效率和目的基因表达率。结果在优化的UTMD条件下phSDF-1α组和phSDF-1α-NFκB组细胞存活率和质粒入胞效率差异均无统计学意义(P均0.05),两组质粒入核率分别为(12.96±4.46)%和(83.25±12.15)%,SDF-1α基因相对表达量分别为(39.25±10.14)%和(118.25±27.57)%,SDF-1α蛋白表达量分别为(14.11±5.74)ng/mg和(65.35±11.12)ng/mg蛋白,后者均显著高于前者。结论 NFκB核定位基序能显著增强质粒入核,提高UTMD介导的外源基因转染效率。
【作者单位】: 武汉大学人民医院;湖北省人民医院超声科;
【基金】:国家自然科学基金(81101058) 武汉市科技攻关项目(2013060602010268)
【分类号】:R346
【正文快照】: 近年来,超声靶向微泡破坏(ultrasound targetedmicrobubbles destruction,UTMD)技术因其靶向、无毒、无免疫反应等优点,已成为一种新的基因转染技术[1-2]。但UTMD同样存在转染效率相对低下的局限性[3]。既往研究[4]利用显微注射法向细胞内注入质粒DNA,结果显示仅3%的质粒被细

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本文编号:1205621

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