血管内皮生长因子全长抗体在毕赤酵母中的表达与活性鉴定

发布时间：2017-11-20 17:12

  本文关键词：血管内皮生长因子全长抗体在毕赤酵母中的表达与活性鉴定

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【摘要】：目的:构建血管内皮生长因子(VEGF)全长抗体表达载体pPICZαA-VH-CH-VL-CL,评价其在毕赤酵母中的表达产物与抗原的结合特性,及其抑制细胞增殖的活性。方法:利用基因合成分别获得VEGF抗体CL和CH序列,分别构建pPICZαA-CH和pPICZαA-CL重组质粒,再利用同尾酶特性构建双启动子表达盒的重组pPICZαA-CH-CL载体,用Westen印迹对其进行表达鉴定后将VH和VL序列插入该载体,获得VEGF的全长抗体表达载体pPICZαA-VH-CH-VL-CL;通过膜筛和ELISA进行菌株筛选,并对VEGF抗体表达阳性菌株进行小量表达和纯化,采用CCK-8法对其抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的活性进行初步评价。结果:获得表达轻、重链的VEGF抗体表达载体,ELISA实验证明pPICZαA-VH-CH-VL-CL具有一定的VEGF抗原结合特性;体外增殖实验表明,该抗体可以以剂量依赖性抑制HUVEC增殖。结论:在毕赤酵母中表达、纯化了具有一定功能活性的VEGF全长抗体,为后续比较研究酵母糖基化改造对VEGF抗体的药效学和药代学的影响提供了基础。
【作者单位】： 解放军医学院病理科;军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室;安徽医科大学研究生学院;解放军第309医院;
【基金】：国家自然科学基金(81272701/H1617) 北京市自然科学基金(5113034)
【分类号】：Q78;R392.1
【正文快照】： 生物技术蛋白类药物(如抗体、疫苗、细胞因子、酶等)多数为糖蛋白。蛋白的糖基化形式分为N-糖基化和O-糖基化两种,其中N-糖基化尤其重要,因为与蛋白的折叠、体内半衰期、稳定性及蛋白功能密切相关[1-2]。迄今,上市的人源化治疗抗体中95%均为哺乳动物表达系统的产物。然而,由于

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本文编号：1207898