miRNA-30c靶向抑制cxcr4a和调控胚胎中内胚层器官形成

发布时间：2017-11-21 03:22

  本文关键词：miRNA-30c靶向抑制cxcr4a和调控胚胎中内胚层器官形成

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【摘要】：研究目的:探讨miR-30c在调控细胞分化中的作用及对脊椎动物早期胚胎发育的影响。方法:1、生物信息学分析:1)从miRBase数据库(http://www.mirbase.org/)中获取各物种mi R-30家族成员的核苷酸序列,并用软件Clustal W进行多序列比对。2)以miR-30家族成员各自原始转录本(pri-miR-30)核苷酸序列为基础的种系树由软件MEGA5中邻接法(neighbor-joining method)计算建立。2、Taq Man PCR技术和胚胎整体原位杂交技术:斑马鱼基因组DNA抽提,PCR和探针质粒构建,地高辛标记反义RNA探针准备,胚胎整体原位杂交,基于TaqMan PCR技术的miRNA表达分析。3、显微注射mi R-30c-duplex、显微注射吗啡啉(morpholino)环标记的反义寡核苷酸:分别将morpholino(吗啡啉修饰反义寡核苷酸链morpholino,dre-miR-30c-MO)、duplex(miR-30c-duplex)和mRNA(体外转录合成的egfp-cxcr4a-3’UTR mRNA、egfp-cxcr4a-3’UTR(miR-30cmut)mRNA)经显微注射进入胚胎细胞并设对照组。4、进行miRNA靶基因预测分析并和全胚胎miRNA靶基因报道系统比对。结果:1、miR-30c母源性低表达,原肠后期至体节中期呈广泛表达且中内胚层表达丰富,受精后24小时特异性表达于胚胎原肾管。2、过表达miR-30c斑马鱼胚胎表现为中内胚层细胞向胚胎中线迁移能力下降,最终呈现双心畸形和内脏畸形。3、特异性抑制miR-30c的成熟,可增强斑马鱼胚胎中内胚层细胞向中线迁移的能力。4、细胞迁移相关因子cxcr4a是miR-30c的潜在靶基因之一。结论:1、初步探讨miR-30c在胚胎发生早期的时空表达模式。2、miR-30c是中内胚层细胞向中线迁移和器官形成的重要调控因子。3、通过上调Cxcr4a蛋白的信号强度可保障胚胎的正常发育。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R321

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1 毛琳;miRNA-30c靶向抑制cxcr4a和调控胚胎中内胚层器官形成[D];苏州大学;2015年

2 安云鹤;文昌鱼Hedgehog信号通路重要成员和Rbx1基因以及TLR2蛋白表达的研究[D];山东大学;2007年

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本文编号：1209519