载体蛋白质破伤风类毒素两种精制方法的研究

发布时间：2017-11-22 07:00

  本文关键词：载体蛋白质破伤风类毒素两种精制方法的研究

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【摘要】：目的比较两种柱层析方法纯化破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT或TTd)化学特性和免疫原性。方法以硫酸铵盐析一步纯化TT原液,再分别以Superdex 200和Sephacryl S-300 HR柱层析进一步纯化,并对纯化TT进行各项化学特性及小鼠免疫原性检测。结果经硫酸铵盐析纯化,TT纯度可达85%左右,再经柱层析纯化后,两种方法测定(SDS-PAGE和HPLC)TT单体含量(纯度)均可达95%以上,盐析和柱层析两步纯化后,蛋白质回收率均在45%以上,各项检定指标均符合《中国药典》三部(2005年版)中《吸附破伤风疫苗制造及检定规程》的要求;纯化TT在小鼠体内产生了较好的免疫原性。结论经一步或多步纯化可显著提高TT的纯度,并最大限度地减少TT二聚体和多聚体含量;采用两种柱层析方法制备的纯化TT具有更好的化学特性和良好的免疫原性。本实验为多糖-蛋白质结合疫苗及其他以TT为联合疫苗组分的疫苗提供了更加安全有效的蛋白质。
【作者单位】： 兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心;
【基金】：国家科技支撑计划项目(2008BAI66B01) 国家科技重大专项疫苗综合性技术研究开发大平台建设(2013ZX09402-302-215) 国家科技部“重大新药创制”科技重大专项课题之国药集团技术创新产学研联盟子课题13价肺炎球菌结合疫苗临床前研究(2011ZX09401-403-012)
【分类号】：R378.81;R392-33
【正文快照】： 破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT或TTd)作为单价或吸附百白破联合疫苗的主要成分已广泛用于婴幼儿及适宜人群的预防接种;随着目前国内外细菌性结合疫苗的迅速发展,b型流感嗜血杆菌结合疫苗、脑膜炎球菌结合疫苗和肺炎球菌结合疫苗已有TT作为载体蛋白质的疫苗成功上市[1-2],其

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