模拟粪便标本单增李斯特菌和伊氏李斯特菌TaqMan双重实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法

发布时间：2017-11-22 20:26

  本文关键词：模拟粪便标本单增李斯特菌和伊氏李斯特菌TaqMan双重实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法

  更多相关文章： 单增李斯特菌 伊氏李斯特菌 TaqMan双重real-time PCR 模拟粪便标本

【摘要】：目的建立一种TaqMan双重实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR),用于模拟粪便标本中单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的快速检测。方法以单增李斯特菌特异基因hly和伊氏李斯特菌特异基因smcL作为靶基因,合成2对引物和其相应的荧光探针,制作标准曲线,建立从模拟粪便标本中直接检测单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的TaqMan双重real-time PCR。利用李斯特菌属中其他种李斯特菌及常见致病菌验证引物、探针的特异性;通过制备模拟粪便标本并对其进行二次增菌后,分别提取DNA,采用TaqMan双重real-time PCR进行检测,以达到快速检测单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的目的。结果采用本研究建立的TaqMan双重real-time PCR对模拟粪便标本的检测结果显示特异性良好,与其他种李斯特菌和其他病原菌均无交叉反应。模拟粪便标本中单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的检测下限分别为2.45×103cfu/g和2.92×103cfu/g;模拟粪便标本在3 h内可得出检测结果,当模拟粪便标本中单增李斯特菌含量为6 cfu/g和伊氏李斯特菌含量为5 cfu/g时,经过增菌后使用双重real-time PCR可检测出阳性结果。结论本研究建立了以单增李斯特菌的特异基因hly和伊氏李斯特菌的特异基因smcL为靶基因的TaqMan双重realtime PCR检测方法,该方法具有特异性好、敏感性高、快速易操作等优点,可用于临床、食品及环境标本的快速诊断,以及我国人群中单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的携带或感染状况的调查分析。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 传染病预防控制国家重点实验室;贵阳医学院微生物学教研室;
【基金】：国家科技重大传染病防治专项(No.2011ZX10004-001,2013ZX10004-101)~~
【分类号】：R346
【正文快照】： 李斯特菌属为革兰阳性短杆菌,广泛存在于环境中,目前已证实致病李斯特菌为单增李斯特菌和伊氏李斯特菌[1]。单增李斯特菌是一种重要的食源性病原菌,能造成人和动物的脑膜炎、败血症、肺炎、发热性胃肠炎、流产等疾病,致病性强,致死率高达30%[2-3]。伊氏李斯特菌于1955年首次在

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 王艳;陈强;李爱华;叶长芸;;模拟粪便标本中的单增李斯特菌的分离和检测[J];疾病监测;2012年06期

2 侯瑞生;王丽;张勤;李丽;张蕾;薛云红;王凯娟;;多重PCR技术及其在病原体检测中的应用[J];中华全科医学;2011年08期

3 王艳;赵爱兰;叶长芸;;荧光定量PCR技术用于模拟临床标本单增李斯特菌检测的研究[J];中国人兽共患病学报;2009年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 谢敬文;严康峰;邓诗桢;蓝文莉;朱自严;;采用多重PCR技术筛选k、Js~b及Di~b阴性稀有血型[J];广东医学;2012年16期

2 王琳;赵宇亮;何建龙;霍萍萍;张聪敏;赵宝华;;产气荚膜梭菌ι毒素研究进展[J];动物医学进展;2013年11期

3 王艳;陈强;李爱华;叶长芸;;模拟粪便标本中的单增李斯特菌的分离和检测[J];疾病监测;2012年06期

4 金东;于波;刘莎;刘凯;徐建国;叶长芸;;粪肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立[J];疾病监测;2013年05期

5 唐玲玲;石玉玲;;产气荚膜梭菌实验室诊断方法综述[J];热带医学杂志;2012年03期

6 叶宇鑫;王彬;师宝忠;唐尚兴;山崎伸二;石磊;;环介导等温扩增技术快速检测单核细胞增生李斯特菌[J];食品与发酵工业;2010年10期

7 邓诗桢;严康峰;谢敬文;蓝文莉;朱自严;莫锦政;马伟文;李英汉;;s、Fy~a、OK~a阴性稀有血型的多重PCR筛选技术应用[J];中华全科医学;2012年05期

8 孟庆峰;刘阳;刘金华;宋战昀;吕文雪;王伟利;钱爱东;;锦鲤疱疹病毒双基因检测方法的研究[J];中国预防兽医学报;2012年01期

9 金东;于波;叶长芸;刘凯;侯雪新;孙渭歌;徐建国;李振军;;屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的研究[J];中国人兽共患病学报;2013年06期

10 董洁;杨晓静;苗承霞;沈晶;杨柳;姜艳芬;许信刚;;产气荚膜梭菌菌落多重PCR方法的建立及初步应用[J];中国兽医学报;2013年12期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 祝儒刚;海产品中致病性副溶血弧菌PCR快速检测体系建立及定量研究[D];沈阳农业大学;2011年

2 孟赫诚;广州市熟肉制品微生物污染状况及其耐药性传播研究[D];华南理工大学;2012年

3 王蓓;基于全基因组序列分析筛选罗非鱼源无乳链球菌ZQ0910株保护性抗原及其免疫保护性研究[D];中国海洋大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 吕二盼;动物源性食品中各种动物源性肉及肉制品鉴别检验的研究[D];河北农业大学;2012年

2 唐玲玲;实时荧光定量PCR方法早期检测产气荚膜梭菌的研究及临床应用[D];广州中医药大学;2012年

3 牟贤波;磁富集多重PCR扩增技术及其应用[D];湖南工业大学;2012年

4 徐冬e，

本文编号：1215975