小鼠肺细小动脉平滑肌细胞原代培养和鉴定以及低氧对其增殖与凋亡的影响

发布时间：2017-11-23 23:01

  本文关键词：小鼠肺细小动脉平滑肌细胞原代培养和鉴定以及低氧对其增殖与凋亡的影响

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【摘要】：目的:建立一种方法简单、重复性好、培养周期短的小鼠肺细小动脉平滑肌细胞(PASMCs)原代培养及传代方法,并初步探索低氧下小鼠PASMCs的增殖与凋亡情况。方法:无菌条件显微镜下分离小鼠肺细小动脉,经胶原酶I消化结合血清铺底法培养PASMCs。传代过程中弃除对细胞损伤大的离心步骤。倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学法和免疫荧光染色法进行α-平滑肌肌动蛋白鉴定,CCK-8显法及TUNEL法测定低氧下PASMCs的增殖与凋亡情况。结果:形态学观察、免疫细胞化学法和免疫荧光染色法鉴定均表明培养的细胞为PASMCs。与大鼠传代后的PASMCs典型的"峰-谷"样生长相比,传代后的小鼠PASMCs形态各异,没有此典型"峰-谷"规律。原代培养后5~7 d即传代,依据细胞活性可传3~5代。CCK-8法显示,与常氧组24 h比较,低氧组A值升高(P0.05)。TUNEL法结果显示低氧24 h后凋亡率较常氧组下降(P0.05)。结论:胶原酶I消化结合血清铺底法培养小鼠PASMCs,方法简单,培养周期短,重复性好,是一种值得推广的小鼠PASMCs体外培养方法。低氧可以促进小鼠PASMCs的增殖,抑制小鼠PASMCs的凋亡。
【作者单位】： 温州医科大学附属第一医院呼吸循环重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81270110) 浙江省自然科学基金资助项目(No.LY13H010003)
【分类号】：R-33
【正文快照】： 近年来基因敲除和基因导入小鼠模型已广泛应用于肺循环疾病的在体研究[1]。而体外模型仍以大 鼠为主要研究对象,基因敲除小鼠由于技术问题难以进入体外研究领域,特别是小鼠肺细小动脉平滑肌细胞(pulmonary arteriolar smooth muscle cells,PASMCs)的传代培养,国内外鲜少报道

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

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【共引文献】

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4 张宏伟;周昱;胡新华;张强;;c-Jun基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响[J];中国普外基础与临床杂志;2009年09期

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中国硕士学位论文全文数据库 前3条

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【二级参考文献】

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2 邵荣标,钱R慊，

本文编号：1220108