弓形虫棒状体蛋白2多克隆抗体制备纯化及其在免疫荧光定位中的运用

发布时间：2017-11-29 06:01

  本文关键词：弓形虫棒状体蛋白2多克隆抗体制备纯化及其在免疫荧光定位中的运用

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【摘要】：目的制备弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)多克隆抗体并纯化。方法将已构建的重组质粒pET32aROP2转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白ROP2,分离上清和包涵体,包涵体洗涤后,用尿素溶解;取纯化蛋白与等体积福氏完全佐剂或不完全佐剂混合,背部皮下免疫新西兰大白兔3次,200μg/次,3次免疫之间分别间隔14 d和19 d,末次免疫10 d后收集兔血清,亲和纯化柱纯化,并用间接ELISA检测抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析抗体特异性。将弓形虫速殖子感染人包皮成纤维细胞(HFF细胞),利用制备所得的多克隆抗体采用免疫荧光法检测ROP2在感染细胞中的定位。结果通过诱导表达,获得重组蛋白ROP2,制备的兔源性ROP2抗体纯化后为单一蛋白抗体。间接ELISA结果显示,抗体滴度为1∶102 400;Western blotting结果显示,抗体特异性良好。同时,免疫荧光定位试验结果显示,ROP2定位在弓形虫的纳虫泡膜上。结论本研究制备并纯化了抗弓形虫ROP2的兔源性多克隆抗体,并成功应用于ROP2在弓形虫纳虫泡膜上的免疫荧光定位试验。
【作者单位】： 南方医科大学公共卫生与热带医学院病原生物学系;
【基金】：国家自然科学基金(No.81071377,81271866) 国家教育部博士点基金(No.20104433120014) 广东省人才引进专项资金(No.2011-26)~~
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种细胞内专性寄生原虫,可引起人兽共患弓形虫病[1]。人误食被弓形虫卵囊污染的食物和水,或含弓形虫包囊的动物肉类而感染[2]。弓形虫入侵宿主细胞后以纳虫泡的形式在宿主细胞内生长和繁殖,而纳虫泡膜主要为宿主细胞膜,以及弓形虫分泌细胞器

【参考文献】

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【相似文献】

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本文编号：1236401