人TOP2A单克隆抗体的制备与初步应用

发布时间：2017-12-04 14:00

  本文关键词：人TOP2A单克隆抗体的制备与初步应用

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【摘要】：目的制备抗TOP2A(DNA拓扑异构酶Ⅱ型α)单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法应用分子生物学技术构建含人TOP2A编码序列的原核表达载体,表达并纯化人TOP2A蛋白。TOP2A蛋白皮下多点和腹腔注射加强免疫Balb/c小鼠,取脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,利用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,采用有限稀释法进行亚克隆,用免疫印迹法、免疫组化染色和流式细胞术对抗体进行特异性鉴定。结果获得了3株能够稳定分泌TOP2A单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为11G5、3B10和10A3,通过免疫印迹、免疫组化和流式结果验证均为阳性。结论成功制备TOP2A单克隆抗体,为进一步的TOP2A蛋白的表达与肿瘤的关系研究奠定了基础。
【作者单位】： 江南大学药学院分子设计与药理学实验室;
【分类号】：R392
【正文快照】： DNA复制是生命的开始,DNA不论线性的还是环状的都是超螺旋的,DNA的转录、复制、翻译和重组都需要将它的超螺旋给解开,这就需要DNA拓扑异构酶的参与,DNA拓扑异构酶的活性及含量也可以作为细胞或者个体生命活性的一种体现,所以在肿瘤细胞中拓扑异构酶的含量要高于正常细胞,这就

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