转录因子Fli-1对巨噬细胞中LPS诱导的IL-27的调控作用及其分子机制研究

发布时间：2017-12-09 19:56

  本文关键词：转录因子Fli-1对巨噬细胞中LPS诱导的IL-27的调控作用及其分子机制研究

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【摘要】：固有免疫应答是机体防御感染性疾病的第一道防线。在固有免疫应答过程中,宿主的不同免疫细胞是如何通过有限的受体迅速识别大量不同的病原微生物,并作出不同的应答反馈是免疫学科中的一个重要的研究热点领域。Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)主要表达于固有免疫细胞表面、内体和溶酶体中,通过识别并结合相应的病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)传递活化信号,从而激发一系列免疫应答过程,继而调控不同类型的趋化因子、干扰素和炎性细胞因子的产生,将病原体和异物清除。白细胞介素27(IL-27)属于IL-6/IL-12细胞因子超家族,是IL-12细胞因子超家族中目前已知唯一既可促进炎症发生发展也可发挥抗炎作用的细胞因子。IL-27基因表达的调控机制目前尚未阐述清楚。本文主要研究了Friend白血病病毒插入位点1(Friend leukemia virusintegration 1,Fli-1)在巨噬细胞中对TLR4介导的IL-27产生的调控作用。我们发现,经细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后,Fli-1的蛋白表达水平逐渐增加。在RAW264.7细胞中转染Fli-1表达质粒建立稳定高表达Fli-1的细胞株,然后用LPS刺激稳筛RAW264.7细胞株,再通过实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附测定(ELISA)的方法检测细胞中IL-27细胞因子的转录水平和上清中IL-27的释放,结果显示高表达组细胞LPS诱导的IL-27 mRNA的转录水平和产生都明显高于对照组细胞。同时,我们利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在小鼠的原代腹腔巨噬细胞中敲低Fli-1的表达,然后再用LPS刺激细胞,结果发现干扰组中LPS诱导的IL-27的转录水平和产生都明显低于对照组细胞。染色质免疫沉淀(Chromatin immunoprecitation,Ch IP)实验结果证明,LPS诱导下的Fli-1进入细胞核后可直接与IL-27p28的启动子区相结合。为进一步确定Fli-1与IL-27p28启动子区结合的具体位置,我们构建了IL-27p28启动子区荧光报告基因质粒并采用双荧光素酶报告基因检测技术,实验结果显示Fli-1与IL-27p28的启动子区转录起始位点上游-250到-150bp区段结合从而促进IL-27的转录。Fli-1属于ETS转录因子家族,该家族成员可以特异性识别并结合GGA(A/T)共有序列来调节靶基因的转录。而IL-27p28启动子区的-250到-150bp区段只有一个GGAA序列,位于-209/-206。将该GGAA序列点突变后,Fli-1介导的IL-27p28荧光报告基因的表达明显下降,说明该GGAA序列是Fli-1调控IL-27p28启动子的主要结合位点。以上实验结果证明,Fli-1能够促进巨噬细胞中LPS诱导的IL-27的转录,从而正向调控TLR4介导的IL-27的产生。本研究首次发现Fli-1可以正向调控IL-27p28基因的转录。此外,Fli-1还可与MyD88和IRF1协同促进IL-27p28荧光报告基因的表达水平。这些结果都将有助于进一步了解天然免疫中炎症反应的调控机理及自身免疫性疾病的发病机制,并为治疗相关疾病提供潜在的药物靶点。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392

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3 邓侠进;;巨噬细胞的抗癌作用[J];遵义医学院学报;1979年02期

4 陆天才;;疾病对肺巨噬细胞的影响[J];煤矿医学;1982年01期

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1 史玉玲;王又明;丰美福;;巨噬细胞激活作用的研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

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3 李奇;王海杰;;透明质酸对于淋巴结巨噬细胞运动的影响[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

4 刘革修;欧大明;刘军花;黄红林;廖端芳;;丙丁酚在体外能抑制巨噬细胞脂质氧化介导的低密度脂蛋白氧化并调节氧化巨噬细胞的分泌功能[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

5 叶金善;杨丽霞;郭瑞威;;环氧化酶-2/前列腺素E_2在血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子中的作用[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

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7 武剑华;徐惠绵;;肿瘤相关巨噬细胞在胃癌中的相关研究[A];第9届全国胃癌学术会议暨第二届阳光长城肿瘤学术会议论文汇编[C];2014年

8 何军;;血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体升高巨噬细胞内胆固醇水平[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢达;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年

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