六味地黄丸对兔椎间盘体外退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响

发布时间：2017-12-20 11:13

本文关键词：六味地黄丸对兔椎间盘体外退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响　出处：《湖南中医药大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:通过观察六味地黄丸对兔椎间盘体外退变模型外基质组分的影响,探讨六味地黄丸防治椎间盘退变的疗效。方法:选取6月龄清洁级新西兰兔20只,参照Haschtmann方法建立整体椎间盘体外培养体系。空气栓塞法处死动物,无菌条件下采用后正中入路或经腹腔前入路取出带终板的L1-L6椎间盘100只,尽量去除终板上附着的的骨组织及韧带,保留终板软骨的完整性,连续以0.9%Na Cl溶液,聚烯吡酮磺溶液以及含55mmol/L柠檬酸钠、50μg/m L庆大霉素的Hanks液漂洗。椎间盘样本置于六孔板中,放在转鼓上(转鼓的转速为10r?h-1),以含5%胎牛血清、50μg/m L庆大霉素、20mmol/L柠檬酸钠的DMEM/F12培养,置于37℃、5%CO2、100%相对湿度温箱中过夜。随机分为空白对照组、TNF-α组、p38-JNK/SAPK阻断组、六味地黄丸血清组,TNF-α+含六味地黄丸血清组。将过夜后标本接种于六孔板,加入8ml含10%胎牛血清、50μg/m L庆大霉素、25μg/m L维生素C的DMEM/F12,置于37℃、5%CO2、100%相对湿度温箱中培养,每两天换液一次。TNF-α组培养液中另含10ng/μl TNF-α2μl;p38-JNK阻断组另含p38MAPK特异性阻断剂SB203580,JNK特异性阻断剂SP600125各20μmol/L各10μl,10ng/μl TNF-α2μl,六味地黄丸血清组培养液中另含六味地黄丸血清10%;TNF-α+含六味地黄丸血清组含10ng/μl TNF-α2μl,六味地黄丸血清10%。分别于培养的第2、4、8、14天收集标本待测。结果:TNF-α组与空白组相比较,TNF-α组蛋白多糖的表达及mRNA含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、II型胶原的表达及m RNA含量明显低于空白组,I型胶原含量及m RNA表达明显高于空白组,P0.05,其差异有统计学意义,说明兔椎间盘体外退变模型成功建立。TNF-α+含六味地黄丸血清组与TNF-α组相比较,TNF-α+含六味地黄丸血清组蛋白多糖的表达及m RNA含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、II型胶原的表达及m RNA含量明显高于TNF-α组;I型胶原含量及m RNA表达明显低于TNF-α组,P0.05,其差异有统计学意义,说明经六味地黄丸含药血清干预后,具有延缓体外椎间盘退变的效果。TNF-α+含六味地黄丸血清组与p38-JNK组相比较,TNF-α+含六味地黄丸血清组蛋白多糖的表达及m RNA含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、II型胶原的表达及m RNA含量明显低于p38-JNK组;I型胶原含量及m RNA表达明显高于p38-JNK组,P0.05,其差异有统计学意义,说明p38-JNK通路存在,且比TNF-α+含六味地黄丸血清组延缓体外椎间盘退变的效果更明显。TNF-α+含六味地黄丸血清组内标本,2天与4天、4天与8天、8天与14天相比较,P0.05,差异有统计学意义,兔蛋白多糖的表达及m RNA含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、II型胶原的表达及m RNA含量逐步下降,I型胶原含量及m RNA表达含量逐步上升,但与TNF-α组比较,趋势较小,表明六味地黄丸能有效延缓椎间盘的退变;TNF-α组内,2天与4天、4天与8天、8天与14天相比较,P0.05,差异有统计学意义,兔蛋白多糖的表达及m RNA含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、II型胶原的表达及m RNA含量逐步下降,I型胶原含量及m RNA表达含量逐步上升,也说明椎间盘退变模型成功建立;六味地黄丸组与空白组比较cP0.05,其差异无统计学意义。结论:在椎间盘体外退变模型中,随着培养时间的延长,终板细胞数量逐渐减少,软骨终板超微结构逐渐损伤,糖胺多糖含量、硫酸软骨素/硫酸角质素比值、透明质酸含量,蛋白多糖及m RNA的表达、II型胶原及m RNA的表达逐渐降低,I型胶原及m RNA的表达逐渐上升,六味地黄丸含药血清能延缓这一变化,但差异无显著性意义(p0.05),在培养基中加入TNF-α能明显上调I型胶原及m RNA的表达,下调糖胺多糖含量、硫酸软骨素/硫酸角质素比值、透明质酸含量,蛋白多糖及m RNA、II型胶原及m RNA的表达,六味地黄丸含药血清可部分对抗TNF-α所导致的改变。
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332

【参考文献】

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