含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区报告基因载体的构建和鉴定
本文关键词:含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区报告基因载体的构建和鉴定 出处:《国外医学(医学地理分册)》2014年03期 论文类型:期刊论文
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【摘要】:目的利用pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector(简称为pmirGLO报告基因载体)构建并鉴定含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区报告基因载体(pmir-Insr-3′UTR及pmirmutant-Insr-3′UTR)。方法以大鼠肝脏cDNA为模板,PCR获取目的片段(即含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区);用PmeI、XbaI双酶切pmirGLO报告基因载体和含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pmir-Insr-3′UTR及pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中均插入目的片段;DNA测序结果进一步证实pmir-Insr-3UTR重组载体中成功插入了胰岛素受体mRNA 3′UTR区,pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中成功插入了在miR-497结合位点含有3个突变碱基的胰岛素受体mRNA 3′UTR片段。结论成功构建了含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR报告基因载体pmir-Insr-3′UTR及pmir-mutant-Insr-3′UTR。
【作者单位】: 西安交通大学医学部;西安交通大学医学部遗传学与分子生物学系;西安交通大学医学部环境与疾病相关基因教育部重点实验室;
【基金】:国家自然科学基金资助项目(No.81370952) 陕西省科技计划资助项目(No.2013K21-22-03) 国家级大学生创新训练资助项目(No.201310698055) 西安交通大学本科生科研训练和实践创新基金资助项目(No.2013273及No.2014X15003)
【分类号】:R3416
【正文快照】: 胰岛素抵抗(Insulin resistance),是指正常数量mega),TRIzol@试剂及Lipofactamine 2000(In-的胰岛素不足以产生对脂肪细胞、肌肉细胞和肝细胞vitrogen),反转录试剂盒RevertaidTM First Strand的正常的胰岛素响应的状况,是严重危害人来健康的cDNA Synthesis及Pmel和Xbal限制性
【共引文献】
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本文编号:1321983
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