幽门螺杆菌硫氧还蛋白-1基因克隆及其重组蛋白表达与活性测定

发布时间：2017-12-25 07:24

  本文关键词：幽门螺杆菌硫氧还蛋白-1基因克隆及其重组蛋白表达与活性测定　出处：《北京大学学报(医学版)》2014年02期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的:克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx1)基因,构建含有该目的基因的原核细胞表达载体,表达纯化该蛋白,并检测该蛋白活性。方法:以Hp国际标准菌株26695的总RNA为模板,设计含有酶切位点的特异性引物,用逆转录PCR的方法扩增Hp Trx1的cDNA,连接至pEASY-T1载体构建成pEASY-T1-Hp Trx1。对pEASY-T1-Hp Trx1进行双酶切后将目的片段连接至pET-30a,形成pET-30a-Hp Trx1重组质粒,并在大肠杆菌BL21 plys S中进行表达。应用镍柱亲和层析纯化重组的Hp Trx1蛋白,并检测其二硫键还原酶的活性。结果:测序结果显示Hp Trx1 cDNA成功连入pET-30a质粒,且与GenBank(HP0824)完全一致。含质粒pET-30a-Hp Trx1的大肠杆菌BL21 plys S成功表达出Hp Trx1蛋白,活性检测显示重组Hp Trx1蛋白具有二硫键还原酶的活性。结论:成功构建原核表达载体pET-30a-Hp Trx1,并表达、纯化出有活性的Hp Trx1蛋白,为进一步研究Hp Trx1的生物学活性及其对肿瘤发生的作用机制奠定了基础。
【作者单位】： 北京大学第三医院消化科;北京大学基础医学院病原生物学系;
【基金】：国家自然科学基金(81270475)资助~~
【分类号】：R378
【正文快照】： 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)作为一种致病菌定植于人体胃内,全世界约有50%的人群感染Hp,它可以引起萎缩性胃炎、消化性溃疡,甚至胃癌[1]。Hp与胃黏膜疾病的关系已被公认,但并非所有的Hp感染均致病,Hp感染后有一小部分会发展为严重的临床后果。目前的研究认为,Hp的致

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