CHO细胞表达的抗炭疽保护性抗原人源化抗体的纯化及质量控制分析

发布时间：2017-12-25 20:25

  本文关键词：CHO细胞表达的抗炭疽保护性抗原人源化抗体的纯化及质量控制分析　出处：《生物技术通讯》2014年06期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的:建立CHO细胞表达的抗炭疽保护性抗原人源化单抗纯化工艺和质量控制方法。方法:收获50 L生物反应器中无血清悬浮培养的CHO工程细胞培养液,通过高速离心去除细胞及碎片后超滤浓缩上清液,经亲和层析、SPFF阳离子交换层析后,将所得目的蛋白质经G25凝胶柱更换缓冲液以完成纯化;对纯化的产品进行单抗鉴别(Western印迹)、相对分子质量(SDS-PAGE和MOLDI-TOF)、纯度(SEC-HPLC)、生物学活性(毒素中和试验)、产品相关杂质(SEC-HPLC检测聚集体、降解产物)、工艺相关杂质(ELISA分析残余宿主蛋白、残余蛋白A)、安全性(凝胶法检测内毒素、薄膜过滤法考察无菌)分析。结果:样品回收率达61.7%;单抗鉴别实验阳性;MOLDI-TOF测定完整分子的相对分子质量为147 995,与预期相符;单体比例为99.25%,二聚体比例为0.75%;EC50值为0.1516μg/m L。残余宿主蛋白、残余蛋白A、内毒素、无菌检查结果符合药典要求。结论:初步建立了纯化工艺和质量控制方法,为抗炭疽人源化单抗药物的研制奠定了基础。
【作者单位】： 军事医学科学院生物工程研究所疫苗与抗体工程研究室;解放军306医院检验科;
【分类号】：R392
【正文快照】： 炭疽是炭疽芽孢杆菌引起的人畜共患重大烈性传染病。炭疽芽孢由于其强烈的致病力和极强的对环境的适应能力,一直被作为重要的生物战剂及生物恐怖剂[1]。炭疽芽孢杆菌外毒素由保护性抗原(protective antigen,PA)、致死因子(lethal factor,LF)和水肿因子(edema factor,EF)3种多

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本文编号：1334313