人不成熟树突状细胞体外扩增及低温冻存的研究

发布时间：2017-12-27 17:37

本文关键词：人不成熟树突状细胞体外扩增及低温冻存的研究　出处：《第三军医大学》2006年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：在大面积深度烧伤患者的救治工作中,及时有效的创面覆盖是治疗的关键。同种异体皮肤移植为创面覆盖提供了良好的思路。但目前临床上移植后的排斥反应严重影响了治疗效果。免疫抑制剂可以延长异体皮的存活时间,但大剂量抗排斥药物的应用同时增加了患者感染的危险性。通过携带供者抗原的不成熟树突状细胞诱导异基因皮肤移植耐受为延长异体皮成活时间的有效途径。树突状细胞(dendritic cell,DC)是体内功能最强的抗原递呈细胞(antigen-presenting cell,APC),是天然免疫和获得性免疫的重要调节剂。在树突状细胞的发育过程中,不成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)与成熟DC(mature dendritic cell,mDC)在表型特征以及生物学功能上都有区别。imDC由于其细胞表面缺乏MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子,在免疫应答过程中非但不能激活T细胞,反而能诱导抗原特异性T细胞无能或凋亡,在诱导抗原特异性免疫耐受中发挥了重要作用。imDC稳定性差,在正常培养条件下难以长期保存,临床上使用的异体皮都来自死后捐赠者,同时烧伤发生具有极大的偶然性,如何长期有效的保存携带供者抗原的不成熟树突状细胞并保持其不成熟特性成为问题的关键。本实验研究脐血来源的不成熟树突状细胞低温冻存前后所表现的生物特性,为不成熟树突状细胞的临床应用提供保存方法。在本研究中,我们取新鲜脐血分离单个核细胞,在体外经粒系—巨噬细胞系集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)诱导产生不成熟树突状细胞,加10%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)/5%二甲基亚砜(DMSO)+6%羟乙基淀粉(hydroxyethyl starch,HES)作为保护剂,-80℃冰箱降温,-196℃保存,35~40℃水浴复温,获得冻存不成熟树突状细胞。光镜下观察台盼蓝拒染回收率;电镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测两组细胞表面成熟标志(CD80、CD83和CD86);混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)检测两组细胞刺激未致敏T淋巴细胞增殖能力。主要结果: 1.培养细胞体积增大,表面可见毛刺样不规则突起,电镜下细胞形态不规则,表面粗糙,明显可见突起及皱襞;细胞表型具有典型的DC特征(CD1a、CD14、CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达率分别为62.49%,18.28%,12.46%,4.60%,11.51%,
[Abstract]:In the treatment of large area deep burn patients, timely and effective wound cover is the key to the treatment. Allograft skin graft provides a good way of thinking for wound cover. However, the repulsive reaction after transplantation has a serious effect on the therapeutic effect. Immunosuppressants can prolong the survival time of the skin allograft, but the use of large doses of anti rejection drugs also increases the risk of infection in patients. The induction of allogenic skin graft tolerance through immature dendritic cells with donor antigen is an effective way to prolong the survival time of the allogenic skin.
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392

【参考文献】