HGF基因修饰的MSC生物学特性及免疫调控作用研究

发布时间：2017-12-27 20:40

  本文关键词：HGF基因修饰的MSC生物学特性及免疫调控作用研究　出处：《中国人民解放军军事医学科学院》2006年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：间充质干细胞(Mesenchymal stem cell，MSC)可通过细胞间作用及分泌细胞因子(HGF、TGF-β等)抑制淋巴细胞增殖，与造血干细胞共移植能够减低GVHD的发生。肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)在小鼠异基因骨髓移植模型中具有免疫抑制和修复损伤作用，从多环节减轻GVHD的发生，同时保留GVL效应。为明确MSC和HGF基因两者联合是否具有免疫协同效应，我们开展了HGF基因修饰MSC免疫调控作用的研究。期望为HGF基因修饰骨髓间充质干细胞防治GVHD提供实验基础。 我们利用Percoll密度梯度离心与贴壁培养扩增人骨髓来源的MSC，利用酶消化后骨片培养的方法分离纯化小鼠骨来源的MSC。上述细胞均呈贴壁生长的成纤维细胞样形态，表型特征分析显示细胞为非造血非内皮细胞群，分化试验证明细胞具有体外成骨和成脂肪能力，说明获得的细胞符合MSC的确认“标准”。 在此基础上，我们观察了HGF基因转染对MSC生物学特性的影响。首先，利用携带GFP基因的腺病毒载体(Ad-GFP)感染MSC，以GFP为报告基因，确定了重组腺病毒对MSC的感染效率。流式检测结果表明，腺病毒感染强度MOI为150时，感染效率几乎达到了100％；我们利用相同MOI的Ad-HGF感染MSC，用ELISA法检测HGF的分泌表达，结果表明感染后HGF可在短期内高效表达。提示腺病毒可以有效介导HGF在MSC中表达。 为确定HGF基因转染对MSC生物学特性的影响，我们检测了转HGF基因MSC(MSC-HGF)的细胞表型，，结果表明转HGF基因不影响MSC表型，与未转染基因细胞相似，MSC-HGF仍表达CD29、CD73、CD105、CD166和HLA-ABC，不表达CD31、CD34、CD45以及HLA-DR。我们进一步检测了MSC-HGF的分化性能，诱导脂肪分化后油红O染色显示MSC-HGF体外成脂肪能力正常；诱导成骨分化后进行ALP活性染色和定量以及Ca沉积定量均表明MSC-HGF仍具有体外成骨能力；用地塞米松诱导后，在mRNA水平检测到成骨、脂肪和软骨分化相关基因的表达；另外，不诱导时MSC-HGF与MSC成骨、成软骨和成脂肪标志分子表达无差异，说明HGF基因修饰本身不引起间充质干细胞分化，并且不影响MSC
[Abstract]:Mesenchymal stem cell (MSC) can inhibit lymphocyte proliferation through intercellular interaction and secretion of cytokines (HGF, TGF- beta, etc.), and co transplantation with hematopoietic stem cells can reduce the occurrence of GVHD. Hepatocyte growth factor (HGF) has immunosuppression and repair injury in mouse allogeneic bone marrow transplantation model, which reduces the occurrence of GVHD from multiple links while retaining GVL effect. In order to determine whether the combination of MSC and HGF genes has an immune synergistic effect, we have carried out a study on the immunoregulation of HGF gene modified MSC. It is expected to provide an experimental basis for the HGF gene modification of bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) for the prevention and treatment of GVHD.
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R346

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本文编号：1343143