内毒素耐受的THP-1细胞系髓系细胞触发受体1表达的实验研究

发布时间：2017-12-28 02:01

  本文关键词：内毒素耐受的THP-1细胞系髓系细胞触发受体1表达的实验研究　出处：《华中科技大学》2006年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 目的应用LPS分两次刺激人单核细胞白血病THP-1细胞系,诱导THP-1细胞产生内毒素耐受。了解单核细胞系统在产生内毒素耐受时,TREM-1在核酸和蛋白质水平的表达,NF-κB在蛋白质水平的表达及TREM-1与NF-κB两者的关系。 方法用无血清培养基培养人THP-1细胞,将细胞随机分为4组(A、B、C、D),A为空白对照,B、C、D为实验组,再将B、C、D分为B1,B2,B3;C1,C2,C3和D1,D2,D3共九个小组。A组用无血清培养基培养THP-1细胞24 h后,再换新无血清培养基培养6 h, A、B、C、D三组分别用含浓度0、0、10、100 ng/mL LPS的无血清培养基培养THP-1细胞24 h,然后依次用含0 ng/mL LPS、10 ng/mL LPS、100 ng/mL LPS和500 ng/mL LPS培养A组、B1,C1,D1小组、B2,C2,D2小组及B3,C3,D3小组各6 h。提取RNA及总蛋白,以RT-PCR检测TREM-1 mRNA水平的表达,以Western Blot检测NF-Κb p65与TREM-1蛋白水平的表达,以ELISA检测培养液上清中TNF-α和IL-10的水平。 结果A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3组TREM-1 mRNA与β-actin光密度比值依次为:0.5641±0.0031、0.6112±0.0012、0.6860±0.0041、0.8360±0.0034、0.4687±0.0031、0.5862±0.0038、0.5958±0.0032、0.4387±0.0038、0.5762±0.0044、0.5894±0.0041。A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3组TREM-1蛋白的灰度值与GAPDH灰度比值依次为:0.4698±0.0096、0.5962±0.0044、0.6541±0.0043、0.7617±0.0050、0.4700±0.0042、0.4878±0.0021、0.5204±0.0010、0.3985±0.0036、0.4393±0.0015、0.4953±0.0051。A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3组NF-κB p65蛋白的灰度值与GAPDH灰度比值依次为:0.7627±0.0009、0.8146±0.0047、0.8661±0.0034、0.9720±0.0065、0.5548±0.0047、0.7852±0.0061、0.8037±0.0052、0.5214±0.0026、0.7742±0.0039、0.7855±0.0041。A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3组TNF-α的吸光度值依次为:0.0746±0.0032、0.0826±0.0053、0.1201±0.0135、0.1904±0.0135、0.0722±0.0037、0.0821±0.0033、0.0859±0.0031、0.0654±0.0047、0.0748±0.0050、0.0812±0.0042。A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3组IL-10的吸光度值依次为:0.0929±0.0052、0.1290±0.0053、0.0966±0.0037、0.0802±0.0044、0.1940±0.0091、0.1124±0.0078、0.0849±0.0047、0.2573±0.0055、0.2553±0.0087、0.2259±0.0074。A、B、C、D各组间差异有显著意义(P0.05);B、C、D各组内部小组间差异有显著意义(P0.05);B1、C1与D1小组、B2、C2与D2小组、B3、C3与D3小组组间差异有显著意义(P0.05)。TREM-1 mRNA的表达与TREM-1蛋白高度正相关(r=0.922, P=0.000);TREM-1mRNA表达水平与NF-κB p65蛋白表达正相关(r=0.936, P=0.000),TREM-1蛋白表达水平与NF-κB p65蛋白表达正相关(r=0.795, P=0.000),TREM-1mRNA表达水平与TNF-α正相关(r=0.901, P=0.000) ,TREM-1蛋白表达与TNF-α水平正相关(r=0.897, P=0.000) ,TREM-1mRNA表达水平与IL-10负相关(r=-0.627, P=0.000) ,TREM-1蛋白表达水平与IL-10负相关(r=-0.661, P=0.000)。在未经处理的THP-1细胞,随着LPS浓度的升高,TREM-1的表达增加;在内毒素耐受THP-1细胞,首刺激的浓度相同,TREM-1的表达随再刺激LPS的浓度升高而升高,而再刺激相同时,首刺激的LPS浓度越高,TREM-1的表达量越低;另外,THP-1细胞中,TREM-1的表达与NF-κB p65和TNF-α水平正相关,与IL-10负相关。 结论TREM-1在LPS刺激单核/巨噬细胞发生反应的信号转导过程中起信号放大作用;TREM-1在THP-1细胞的内毒素耐受形成过程及脓毒症的发生过程中起重要作用。
[Abstract]:Objective to stimulate the THP-1 cell line of human monocytic leukemia two times by using LPS to induce endotoxin tolerance in THP-1 cells. To understand the expression of TREM-1 at the level of nucleic acid and protein, the expression of NF- kappa B at protein level and the relationship between TREM-1 and NF- kappa B in monocyte system during endotoxin tolerance.
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R363

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本文编号：1344088