小鼠骨髓源耐受性树突细胞的分离培养及功能鉴定

发布时间：2017-12-29 07:09

  本文关键词：小鼠骨髓源耐受性树突细胞的分离培养及功能鉴定　出处：《中国免疫学杂志》2014年05期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的:建立小鼠骨髓源耐受性树突状细胞(CD11b+F4/80+TDCs)体外培养及功能鉴定方法。方法:以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组白介素4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为未成熟树突细胞(iDCs),收集第六天的细胞采用流式细胞术分离纯化CD11b+F4/80+TDCs。倒置显微镜动态观察细胞形态学变化,流式细胞术观察并分选CD11b+F4/80+TDCs,CD11b+F4/80+TDCs的耐受功能通过MHCⅡ类分子、CD83、IDO、TLR-2的表达及IL-10和TGF-β1细胞因子的产生进行评价。流式细胞术测定MHCⅡ类分子表达,免疫组化法测定CD83、IDO、TLR-2的表达,ELISA法测定IL-10和TGF-β1的水平,同时设LPS刺激诱导的成熟树突细胞(mDCs)作对照。结果:镜下可见新鲜分离的骨髓细胞呈圆形,体积小,2 d后,部分细胞形态发生改变,体积增大,细胞聚集成团,培养5~6 d,细胞集落增多,形态不规则。同时表面出现较多毛刺样突起。CD11b+F4/80+TDCs含量在23%左右,经流式分选后细胞纯度达到99%以上。与mDCs比较,CD11b+F4/80+TDCs低表达MHCⅡ和CD83,高表达IDO、TLR-2,并分泌IL-10和TGF-β1。结论:用小鼠rmGM-CSF和rmIL-4体外能成功诱导小鼠骨髓源CD11b+F4/80+TDCs,并且CD11b+F4/80+TDCs通过表达IL-10、TGF-β1、IDO和TLR-2显示耐受功能。
[Abstract]:......
【作者单位】： 安徽医科大学临床药理研究所 抗炎免疫药物教育部重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(No.81330081,31100640,81173075) 省自然科学基金(No.11040606M195)资助项目
【分类号】：R392.12
【正文快照】： 树突细胞(Dendritic cells,DCs)作为目前发现的功能最强大的专职抗原递呈细胞(Antigen-presen-ting cell,APC),在参与T细胞免疫和维持外周免疫耐受中起重要作用[1,2]。DCs具有免疫原性和耐受性双重作用,DCs的免疫原性表现为能够激活初始T淋巴细胞,在T淋巴细胞依赖的体液免疫和

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：1349251