抗人CD13单克隆抗体的研制

发布时间：2017-12-29 10:30

  本文关键词：抗人CD13单克隆抗体的研制　出处：《中国协和医科大学》2006年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：实验目的 通过基因免疫的方法研制抗人髓细胞表面分子CD13单克隆抗体。 实验方法 1)RT-PCR克隆人CD13分子酶活性域(第69～480位氨基酸)基因，将此基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)／CD13。2)用基因免疫的方法，将重组质粒pcDNA3.1(+)／CD13通过肌肉注射免疫BALB／C小鼠，经两次常规免疫后，经尾静脉注射高表达CD13的髓细胞白血病细胞系HL60进行加强免疫。3)用常规免疫学技术，取基因免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系NS1融合，初步筛选出稳定大量分泌抗人CD13单克隆抗体的杂交瘤细胞株。4)使用各种高表达或不表达CD13的细胞系、正常人外周血细胞和10例白血病患者骨髓样本，通过间接免疫荧光流式细胞术、荧光显微镜检测以及Western Blot实验，对单抗进一步的鉴定，获得特异性和临床符合率最好的杂交瘤细胞株2E3。5)经免疫球蛋白类别检测试剂盒检测抗人CD13单抗类别。6)对2E3进行小鼠体内扩大培养，将诱生腹水通过羟基磷灰石柱亲和层析制备纯品2E3，并用FITC标记，制备抗人CD13单抗FITC-2E3。7)通过竞争抑制实验，明确2E3与已知常用抗人CD13单抗所识别CD13分子表位的异同。 结果 1)构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)／CD13，经测序鉴定完全正确。2)共获得7株大量稳定分泌抗人CD13单克隆抗体的的杂交瘤克隆株。3)抗人CD13单抗类别均为IgM类，κ链。4)获得抗人CD13单抗纯品2E3及荧光标记抗体FITC-2E3，经鉴定可用于FCM(流式细胞术)，适用于临床白血病MFC-IM诊断。5)2E3与已知抗CD13单抗Leu-M7、WM15识别CD13分子不同表位。 结论 用基因免疫的方法，成功研制出抗人CD13单克隆抗体，，并获得纯品2E3和荧光标记单抗FITC-2E3，不仅可用于MFC-IM检测，并可以进一步对其相关生物
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392

【共引文献】

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本文编号：1349924