中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖识别域的克

发布时间：2017-12-30 13:16

本文关键词：中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖识别域的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备和鉴定　出处：《华中科技大学》2006年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的本课题旨在构建中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域原核表达质粒,在宿主菌内诱导表达后得到纯化目的蛋白,免疫小鼠,制备多克隆抗体。方法应用RT-PCR技术,从中国旱獭肝组织中扩增ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,利用引入的限制性酶切位点体外连接定向克隆到原核表达载体pRSET-B内,IPTG诱导表达,利用Ni~(2+)亲合层析纯化目的蛋白,并通过Western blot方法检测目的蛋白的抗原性。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、Western blotting及免疫组织化学(IHC)检测抗体的灵敏度和特异性结果1.通过PCR、酶切和核苷酸测序表明:成功构建了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域原核表达质粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2。2 . SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析表明,目的蛋白在表达菌BL21(DE3)plysS内可以高效表达,观察到目的蛋白以包涵体的形式存在;并通过Ni~(2+)亲合层析获得了高纯度的目的蛋白。3.利用目的蛋白免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,对其进行性质鉴定,证明多.抗具有较好的特异性和较高的效价。结论1、成功地构建了原核表达质粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2。 2、获得的中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域的多克隆抗体具有特异性较好、效价较高等优点.。本课题的创新点 1.国内首次成功构建了表达中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域的原核表达质粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2。 2.国内首次利用变性的ASGPR CRDH1和CRDH2融合蛋白免疫小鼠获得了两株特异性好、效价高、敏感性强的多克隆抗体,在肝脏疾病的靶向治疗研究中具有潜在的应用价值。本研究的意义中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体CRDH1和CRDH2可作为靶向受体分子,对肝脏疾病靶向治疗的研究起到重要的作用。利用纯化的变性ASGPR CRDH1和CRDH2免疫小鼠,成功获得了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体CRDH1和CRDH2的多克隆抗体。通过各种性质鉴定,为其今后在科研方面的合理使用提供了有力的实验依据。
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【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392

【参考文献】