人噬菌体抗体库的构建及人源性bFGF抗体的筛选
本文关键词：人噬菌体抗体库的构建及人源性bFGF抗体的筛选 出处：《免疫学杂志》2006年04期 论文类型：期刊论文
【摘要】：目的选用含高效价碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抗体的自身免疫病患者外周血淋巴细胞为材料,构建人噬菌体抗体库,并从中筛选抗bFGF抗体克隆。方法收集自身免疫病患者外周血,提取淋巴细胞总RNA后逆转录得到cDNA第一链,经PCR扩增重链Fd段和轻链基因,分别构建到噬菌粒载体pComb3中,将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌XL1Blue,以辅助噬菌体VCSM13超感染,构建人噬菌体抗体库。经过3轮固相筛选,获得能结合bFGF的抗体克隆,并用ELISA进行进一步鉴定及筛选,获得具有高亲和力的抗bFGF噬菌体抗体克隆。结果构建的人源噬菌体抗体库库容为2.5×107,经3轮筛选获得具有bFGF特异性的F
[Abstract]:Objective to construct human phage antibody library from peripheral blood lymphocytes of patients with autoimmune disease containing high titer basic fibroblast growth factor (bFGF) antibody. Methods Peripheral blood samples of patients with autoimmune disease were collected and total RNA of lymphocytes was extracted and reverse transcripted to obtain the first strand of cDNA. The heavy chain FD segment and light chain gene were amplified by PCR and constructed into the bacteriophage vector pComb3 respectively. The recombinant bacteriophage vector was electrotransformed into Escherichia coli XL1Blue. A human phage antibody library was constructed with the aid of phage VCSM13 superinfection. After three rounds of solid phase screening, the antibody clones which could bind to bFGF were obtained and further identified and screened by ELISA. BFGF phage antibody clones with high affinity were obtained. Results the human phage antibody library containing 2.5 脳 107 phage antibody library was constructed, and bFGF specific F was obtained by three rounds of screening.
【作者单位】： 暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心 暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心 暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心 暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心 暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心
【基金】：国家自然科学基金(30471607) 教育部科学技术项目(105175)资助
【分类号】：Q782;R392
【正文快照】： 碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowth factor,bFGF)是成纤维细胞生长因子家族的重要成员之一。研究表明,bFGF能促进肿瘤血管的新生、肿瘤细胞的增殖以及增强肿瘤的耐药性,因此在肿瘤的发生发展中起重要作用[1,2]。此外,bFGF还参与肝、矽肺等纤维化的形成[3]。在这
【参考文献】
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【共引文献】
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本文编号：1358996
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