抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备与鉴定

发布时间：2017-12-31 15:24

  本文关键词：抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备与鉴定　出处：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》2007年03期 　论文类型：期刊论文

  更多相关文章： 卵黄免疫球蛋白 日本血吸虫 免疫诊断 循环抗原

【摘要】：目的制备特异性抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)并检测其特异性、敏感性。方法用日本血吸虫SEA经翅膀下静脉和皮下免疫25周龄海兰母鸡4次(首次剂量为60μg/只,加强剂量为30μg/只),每次间隔10d。取免疫前和首次免疫后35d的鸡蛋卵黄,分别用水稀释法提取IgY,BCA法测定蛋白含量,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Westernblotting)分析,ELISA检测纯化后IgY特异性和敏感性。分别提取免疫后不同时间的卵黄抗体,观察抗体效价的变化。结果海兰母鸡经SEA首次免疫后35d,每枚蛋经提纯后可得到约61mg抗体,经SDS-PAGE和Westernblotting分析,纯化的IgY有1条主要蛋白带,相对分子质量(Mr)为130000,并可被SEA识别。母鸡初次免疫后第10天,经SDS-PAGE和ELISA分析,鸡蛋卵黄内即有抗体产生,初次免疫后31d效价可达1∶1600。双抗体夹心ELISA结果显示纯化后的IgY有较高的敏感性,可检测到的SEA达2.4ng/ml。结论制备的抗SEA鸡卵黄抗体的特异性和敏感性均较高。
[Abstract]:Objective to prepare chicken egg yolk immunoglobulin (IgY) against Schistosoma japonicum soluble egg antigen (SEAA) and detect its specificity. Methods 25-week-old Hailan hens were immunized with Schistosoma japonicum SEA (60 渭 g for the first time and 30 渭 g for each) with subcutaneous and subcutaneous immunization. The egg yolk before immunization and 35 days after the first immunization were collected at intervals of 10 days and the protein content was determined by water dilution method. Sodium 12 alkyl sulfonate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blotting were performed. ELISA was used to detect the specificity and sensitivity of purified IgY. The egg yolk antibody was extracted at different time after immunization and the titer of antibody was observed. The results showed that Hailan hens were immunized with SEA for 35 days. After each egg was purified, about 61mg antibody was obtained. SDS-PAGE and Westernblotting analysis showed that the purified IgY had a major protein band. The relative molecular weight (Mr) was 130000and could be recognized by SEA. On the 10th day after the first immunization of hens, SDS-PAGE and ELISA analysis showed that antibodies were produced in egg yolk. The titer of the purified IgY was 1: 16000.The results of double antibody sandwich ELISA showed that the purified IgY had a high sensitivity. The detectable SEA was 2.4 ng / ml. Conclusion the specificity and sensitivity of anti SEA yolk antibody were higher.
【作者单位】： 华中科技大学同济医学院病原生物学系 华中科技大学同济医学院病原生物学系 华中科技大学同济医学院病原生物学系 华中科技大学同济医学院病原生物学系 华中科技大学同济医学院病原生物学系 华中科技大学同济医学院病原生物学系 华中科技大学同济医学院病原生物学系
【基金】：国家863高技术研究发展计划(No.2006AA02A251)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 血吸虫病的诊断方法主要有病原学诊断和免疫学诊断。由于病原学方法对慢性病人和低度感染者检出率低,因此免疫学诊断方法的建立和改进是多年来血吸虫病诊断的研究热点。当前国内免疫学诊断主要是检测抗体,常用的方法有环卵沉淀试验(COPT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血凝

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 仇镇宁,冯振卿,朱昌亮,李芸茜,管晓虹;用单克隆抗独特型抗体NP30检测血吸虫病短程抗体的研究[J];南京医科大学学报;1999年01期

2 余清声,王桂平,王薇,覃媛,黄劭;抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的研制及初步应用[J];中华微生物学和免疫学杂志;2004年09期

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 郭俭;郭家钢;;血吸虫病早期免疫诊断的研究进展[J];国外医学.寄生虫病分册;2005年06期

2 徐福洲,王金洛,杨兵,宋维平,赖平安,秦泽荣,孟彦妮;抗猪产肠毒素大肠埃希氏菌卵黄抗体的研制及攻毒治疗试验[J];华北农学报;2002年04期

3 施强,杨婷婷;IgY抗体用于弓形虫感染小鼠病原学检测的研究[J];海峡预防医学杂志;2002年01期

4 黄跃龙;抗体及其亚类检测考核血吸虫病疗效的研究进展[J];中国热带医学;2002年04期

5 刘四红;侯力强;孔天翰;;抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备及其效价测定[J];蛇志;2006年01期

6 李金荣;蓝海;;中西医结合治疗毒蛇咬伤的新进展[J];蛇志;2006年02期

7 梁幼生,朱荫昌,宁安,戴建荣,徐明,杨小红,华万全,熊玉霞,高祖禄,胡启龙;FA-ELISA检测血吸虫病人短程抗体试剂盒近期疗效考核价值的研究[J];中国血吸虫病防治杂志;2001年02期

8 王祝鸣,冯振卿,仇镇宁,李芸茜,管晓虹;日本血吸虫单克隆anti-anti-id的建株及初步鉴定[J];中国血吸虫病防治杂志;2001年04期

9 吴玉龙;许宁;仇镇宁;陈凤;李远林;方文;杨杰;冯振卿;管晓虹;;日本血吸虫抗独特型抗体NP30抗体检测法在云南大山区应用效果的评价[J];中国血吸虫病防治杂志;2006年03期

10 刘四红;孔天翰;;抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备、纯化和保护性实验研究[J];中国病理生理杂志;2006年12期

相关会议论文 前1条

1 王金洛;宋维平;徐福洲;杨兵;赖平安;王琴;孟燕妮;;抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体(PEDV-IgY)及其特性研究[A];2003北京国际养猪研讨会暨展览会论文集[C];2003年

相关硕士学位论文 前10条

1 王玉燕;特种经济动物抗CDV、CAV、CPV免疫球蛋白的制备与应用[D];山东农业大学;2002年

2 刘剑南;卫氏肺吸虫重组抗原的制备及应用研究[D];南京医科大学;2003年

3 孙钦伟;肠产毒素大肠杆菌高免蛋黄粉抗体的吸收及若干因子对其活性影响的初步研究[D];南京农业大学;2003年

4 王翔宇;卵黄免疫球蛋白亲和配基分离蛇毒Gln49-PLA_2的研究[D];大连理工大学;2004年

5 曹军;猪三十九肽胆囊收缩素（CCK39）的基因克隆、表达及其抗体的制备[D];扬州大学;2005年

6 史政荣;抗内毒素IgY-F（ab′）_2的制备与体外生物学效应研究[D];第三军医大学;2005年

7 吴玉龙;日本血吸虫抗独特型抗体NP30抗体检测法在云南大山区流行现场应用的研究[D];南京医科大学;2006年

8 许宁;日本血吸虫病抗独特型抗体NP30检测系统的优化[D];南京医科大学;2006年

9 孙凌霜;鸭和鹅A型禽流感间接ELISA抗体检测方法的建立[D];东北农业大学;2006年

10 张笑意;精制抗新城疫病毒卵黄抗体的研制[D];南京农业大学;2006年

【二级参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 杨婷婷,李世清,郭维植,施强;抗肠出血性大肠杆菌O157∶H7鸡卵黄抗体的初步研究[J];海峡预防医学杂志;2001年04期

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王薇;;用大剂量X线照射的童虫疫苗预防牛日本血吸虫病[J];国际医学寄生虫病杂志;1984年02期

2 黄辛;;中国科学家公布日本血吸虫基因天书"首次通过国内生物信息平台向全世界发布大规模基因组序列数据[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2006年03期

3 李齐;感染日本血吸虫小鼠的脾细胞产生的嗜酸性粒细胞趋化淋巴因子(ECF-L)[J];国际免疫学杂志;1987年05期

4 张恩英,娄文娴,薛纯良,王兆军;日本血吸虫病患者尿液中循环抗原和抗体联合检测的诊断价值[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2000年01期

5 裘丽姝,冯正,张永红,李浩;多克隆与单克隆抗体夹心ELISA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2000年02期

6 黄华;姜昌富;黄进;;蚯蚓与日本血吸虫交叉反应抗原的初步探讨[J];中国人兽共患病学报;2006年05期

7 翟羽佳;刘全;;日本血吸虫新型疫苗的研究进展[J];中国生物制品学杂志;2009年05期

8 倪永晖;日本血吸虫病鼠体内肉芽肿炎症的调节机制[J];国际医学寄生虫病杂志;1987年05期

9 娄文娴,俞安洲,张奇儿;一种对日本血吸虫病具有诊断潜力的单克隆抗体[J];现代免疫学;1990年02期

10 田生和;;HLA-DQ控制的T细胞对日本血吸虫可溶性虫卵抗原的应答[J];国际医学寄生虫病杂志;1991年04期

相关会议论文 前10条

1 张兆松;;日本血吸虫病分子疫苗的研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展（上册）[C];2001年

2 王成祖;张瑾;刘池波;刘文琪;;抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备与鉴定及其初步应用[A];第二届中国医学细胞生物学学术大会暨细胞生物学教学改革会议论文集[C];2008年

3 刘朔婕;戴五星;;日本血吸虫多价膜锚定表达疫苗pIRES-Sj97-sj14-Sj26的构建及其免疫原性的研究[A];湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第八届第十七次学术年会论文汇编[C];2007年

4 温志立;汪世平;曾宪芳;吴朝阳;沈国励;;压电免疫传感器用于检测日本血吸虫循环抗原的研[A];中国动物学会第六届全国青年寄生虫学工作者学术讨论会论文摘要集[C];2000年

5 王成祖;张瑾;刘池波;刘文琪;;抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备与鉴定及其初步应用[A];2009年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2009年

6 刘伟;朱兴全;戴荣四;林瑞庆;宋慧群;程天印;刘毅;;湖南省日本血吸虫线粒体nad4基因的多态性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年

7 刘伟;朱兴全;戴荣四;林瑞庆;宋慧群;程天印;刘毅;;湖南省日本血吸虫线粒体cox1基因的多态性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年

8 宋震宇;刘金明;何金桃;孙帅;石耀军;李浩;陆珂;林矫矫;岳城;;东方田鼠血清筛选噬菌体展示抗原对小鼠日本血吸虫病免疫效果观察[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年

9 钱宝珍;胡海涛;;先天性感染日本血吸虫家兔攻击感染后血清抗体动态的研究[A];2005年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术会议论文汇编[C];2005年

10 张蕾;杨艳芬;杨雪;苏川;张兆松;;抗日本血吸虫感染的新型T细胞表位疫苗的研究[A];中华医学会热带病与寄生虫学分会机会性感染学术研讨会论文汇编[C];2007年

相关博士学位论文 前10条

1 姜宁;日本血吸虫RNA疫苗探索及Sj23抗原对宿主免疫调节机制的研究[D];吉林大学;2009年

2 朱翔;日本血吸虫辐照尾蚴免疫小鼠早期免疫应答特征及其相关分子机制的研究[D];南京医科大学;2005年

3 余俊龙;SjHGPRT和SjSDISP全长cDNA的克隆、表达及保护性免疫研究[D];中南大学;2006年

4 张蕾;抗日本血吸虫感染表位PDDV疫苗的研究[D];南京医科大学;2007年

5 闻礼永;日本血吸虫大陆株硫氧还蛋白在毕氏酵母菌的克隆表达及其免疫反应性研究[D];南京医科大学;2007年

6 胡媛;日本血吸虫23kDa膜蛋白（Sj23）和脂肪酸结合蛋白（Sj14）的双价DNA疫苗免疫保护性研究[D];华中科技大学;2007年

7 蔡鹏飞;日本血吸虫多表位疫苗构建探索和TSP-2抗原鉴定[D];中国协和医科大学;2008年

8 戴橄;日本血吸虫雌雄合抱相关蛋白的分离、鉴定及其DNA疫苗的研究[D];中南大学;2006年

9 夏艳勋;日本血吸虫性别差异表达基因的筛选及新基因的克隆分析[D];华南农业大学;2006年

10 张玉侠;Th17/IL-17在日本血吸虫感染小鼠肝脏肉芽肿病变中的作用及其机制[D];安徽医科大学;2011年

相关硕士学位论文 前10条

1 王成祖;抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备与鉴定[D];华中科技大学;2007年

2 濮翔科;ICOS转基因小鼠模型的建立及其在日本血吸虫病研究中的应用[D];苏州大学;2005年

3 李晔;抗日本血吸虫病二价多表位疫苗研究[D];扬州大学;2010年

4 王玮;基于生物信息学的日本血吸虫糖代谢研究[D];华中师范大学;2007年

5 徐丛荣;日本血吸虫组织蛋白酶B基因的克隆、表达及初步鉴定[D];福建医科大学;2007年

6 高胜岩;日本血吸虫多价DNA疫苗的构建及免疫保护性研究[D];吉林农业大学;2008年

7 付光伟;日本血吸虫表膜结构蛋白Annexin基因克隆、表达与免疫保护效果评估[D];福建农林大学;2009年

8 赵志荣;日本血吸虫Mago nashi基因的克隆、表达与功能鉴定[D];安徽医科大学;2007年

9 李健;日本血吸虫四跨膜蛋白2大亲水区（Sj TSP_2HD）表达及免疫保护性的研究[D];江苏省血吸虫病防治研究所;2008年

10 张诗海;轮状病毒SA11衣壳蛋白VP7的毕赤酵母重组表达及IgY的制备[D];安徽医科大学;2009年

，

本文编号：1360350