增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓基质细胞诱导的成骨样细胞的实验研究
本文关键词：增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓基质细胞诱导的成骨样细胞的实验研究 出处：《四川大学》2006年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的 将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)基因转染至由兔骨髓基质细胞(marrow stromal cells，MSCs)诱导的成骨样细胞中，探讨EGFP作为移植细胞示踪剂的可行性。 方法 抽取兔股骨骨髓后直接接种在含有L-DMEM完全培养基的培养瓶中，24小时后首次换液，体外培养扩增。将传至第4代的细胞用成骨诱导液向成骨细胞诱导，10天后检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)的活性和Ⅰ型胶原蛋白的表达。 用脂质体转染试剂将质粒pEGFP-C1转染至诱导的成骨样细胞中，观察其瞬时转染效果；转染72小时后，用含G418的成骨培养液进行筛选，继续培养25天，观察稳定转染情况。 结果 原代培养接种24小时即可见细胞贴壁生长，呈梭型、多角型的成纤维细胞样，增殖迅速，传代后生长情况良好。MSCs经成骨培养液诱导后，，形态未发生显著改变；但是，具有ALP的活性，并可以表达Ⅰ型胶原蛋白。经转染EGFP基因后25天可稳定表达绿色荧光蛋白。 结论 EGFP能转染到由MSCs诱导的成骨样细胞中稳定表达，因此可以作为骨组织工程种子细胞的示踪剂。
[Abstract]:Objective to transfect the enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene into osteoblast like cells induced by rabbit bone marrow stromal cells (marrow stromal cells, MSCs), and explore the feasibility of EGFP as a tracer for transplanted cells.
Flask extraction method of rabbit femoral bone marrow after direct inoculation in complete medium containing L-DMEM, 24 hours after the first medium change, then cultured in vitro. The fourth passage of cells with osteogenic differentiation was induced into osteoblasts, 10 days after the determination of alkaline phosphatase (alkaline phosphatase, ALP) activity and expression of type I collagen.
The plasmid pEGFP-C1 was transfected into the osteoblast like cells by liposome transfection reagent, and the transient transfection effect was observed. After transfection for 72 hours, the plasmid containing G418 was screened and cultured for 25 days to observe the stable transfection.
Results the cultured cells were incubated for 24 hours adherent, spindle, fibroblast like, into a multi angle type rapid proliferation after passage.MSCs grew well after osteogenic culture medium induced morphology did not change; however, with ALP activity, and expression of type I collagen. After 25 days after transfection with EGFP gene stable expression of green fluorescent protein.
Conclusion EGFP can be transfected to stable expression in osteoblast induced by MSCs, so it can be used as a tracer for bone tissue engineering seed cells.
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R329
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