脐血单个核细胞体外诱导为肝样细胞的研究

发布时间：2018-01-02 01:32

本文关键词：脐血单个核细胞体外诱导为肝样细胞的研究　出处：《福建医科大学》2007年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： [背景]随着胚层限制理论的打破，成体干细胞的可塑性已成为近年来的研究热点。脐血干细胞以其干细胞含量高、来源丰富、采集简单、比较纯净等特点可能成为包括肝细胞在内的多种细胞的较好来源。 [目的]探讨在细胞外基质人血浆纤维连接蛋白的存在下，用成纤维细胞因子4(FGF—4)和肝细胞生长因子(HGF)联合诱导人脐血单个核细胞向肝样细胞分化的可行性。 [方法]采集足月健康产妇脐带血至含CPDA抗凝剂的无菌采血袋中，用等体积3％明胶沉淀红细胞后采用密度梯度离心法分离单个核细胞，利用贴壁时间的差异去除成熟贴壁细胞，然后接种于DMEM低糖培养基，在用人血浆纤维连接蛋白包被过的培养板中进行贴壁培养。分为诱导组和未诱导组两组，诱导组添加细胞因子HGF和FGF-4。在培养的第0、7、14、21、28天，分别以RT-PCR和免疫细胞化学染色方法检测分析甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、角蛋白18(CK-18)在转录和翻译水平的表达情况。并用糖原染色(PAS)方法检测诱导后细胞是否具有正常成熟肝细胞合成糖原的功能。 [结果](1)倒置显微镜下观察到的形态变化：诱导后细胞体积逐渐变大，形状由圆形逐渐变为椭圆形、不规则圆形、多边形等，，部分具有双核多核呈现出典型的肝样细胞的形态特点。在细胞密度较高的区域有多个细胞聚集在一起的融合现象，这些高密度区域的细胞形态变化较低密度区更为明显。(2)免疫细胞化学染色结果：诱导后第7、14、21、28天ALB和CK-18染色均为阳性着色；AFP染色在诱导第7、14天呈阳性着色，第21天阳性着色细胞减少，到28天基本变为阴性。在未诱导组这些指标均未见表达。(3)PAS染色结果：在第21天呈现弱阳性着色，到第28天显示强阳性着色。无细胞因子组染色呈阴性。(4)RT-PCR结果：在诱导后7、14、21天未成熟肝细胞具有的表型AFP在转录水平有表达，到28天后即呈阴性表达。成熟肝细胞表型ALB和CK-18于诱导的第7天在转录水平就开始表达，于诱导的第14天就有明显表达并一直持续到检测的第28天。 [结论]联合应用HGF和FGF-4可诱导脐血单个核细胞向肝细胞表型和功能的细胞分化。这种培养体系可能为用细胞移植疗法治疗损伤性疾病提供肝细胞。
[Abstract]:In recent years , the plasticity of adult stem cells has become a hot spot in recent years . The umbilical cord blood stem cells can be a good source of many kinds of cells , including liver cells , with the characteristics of high content of stem cells , abundant source , simple collection , and purity . Objective : To investigate the feasibility of using fibroblast growth factor 4 ( FGF - 4 ) and hepatocyte growth factor ( HGF ) to induce the differentiation of human umbilical cord blood mononuclear cells into liver - like cells in the presence of fibronectin . Methods : Human umbilical cord blood was collected in a sterile blood bag containing CPDA anticoagulant . After precipitating red blood cells with equal volume of 3 % gelatin , the cells were isolated by density gradient centrifugation , and then cultured in DMEM low - sugar medium . The expression of AFP , ALB and CK - 18 were detected by RT - PCR and immunohistochemical staining . Positive staining was observed on 7th , 14th , 21st , 28th , 28th and 28th day after induction . ( 3 ) Positive staining was observed on 7th , 14th , 21st , 28th and 28th days after induction . Conclusion : HGF and FGF - 4 can induce differentiation of human umbilical cord blood mononuclear cells to hepatocytes phenotype and function .

【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R329.2

【参考文献】