Ubiquitin真核表达载体构建及在293T细胞中的表达

发布时间：2018-01-03 03:37

  本文关键词：Ubiquitin真核表达载体构建及在293T细胞中的表达　出处：《石河子大学学报(自然科学版)》2014年04期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：为构建泛素分子pcDNA3.1-Myc-ubiquitin真核表达载体,实现其在293T细胞中表达。采用人工合成ubiquitin基因序列并加入c-Myc标签序列及EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的方法,克隆至pcDNA3.1真核表达载体中。重组表达质粒经PCR和测序鉴定正确后,脂质体法转染入293T细胞。Western blot和间接免疫荧光法分析重组质粒在细胞中的蛋白表达及定位情况。菌落PCR及测序等分析结果显示:成功构建了pcDNA3.1-Myc-ubiquitin真核表达载体。免疫荧光和Western-Blot结果显示:Myc-ubiquitin重组表达质粒在293T细胞中获得高效表达且蛋白定位于胞浆。由此可知,成功构建pcDNA3.1-Myc-ubiquitin融合表达载体并在293T细胞中高效表达,为课题组进一步探讨与泛素化修饰相关的neuritin的作用机制及功能奠定基础。
[Abstract]:To construct eukaryotic expression vector of ubiquitin molecule pcDNA3.1-Myc-ubiquitin. The method of synthesizing ubiquitin gene sequence and adding c-Myc tag sequence as well as EcoR 鈪，

本文编号：1372212