大肠杆菌志贺毒素Ⅱ型e突变体和蓖麻毒素诱导Vero细胞凋亡的研究

发布时间：2018-01-04 16:43

  本文关键词：大肠杆菌志贺毒素Ⅱ型e突变体和蓖麻毒素诱导Vero细胞凋亡的研究　出处：《贵州大学》2006年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的：探讨志贺毒素Ⅱ型e突变体(shiga toxin Ⅱe varriant，Stx2e)和蓖麻毒素(ricin)诱导非洲绿猴肾细胞系Vero细胞凋亡的作用及其相关凋亡基因的表达。 方法：用硫酸铵沉淀法制备Stx2e突变体粗毒素；经Sephrose 4B柱亲和层析和SephadexG—100凝胶过滤，分离得到ricin。分别用不同浓度的Stx2e粗毒素和ricin处理Vero细胞，采用细胞形态学、AO／EB荧光染色法、DNA Ladder检测细胞凋亡的发生；应用western blotting检测凋亡相关基因Caspase-9、Bax和Caspase-3表达的变化。 结果：Stx2e粗毒素在体外对Vero细胞有明显的诱导凋亡效应，且呈较明显的剂量和时间依赖性；ricin对Vero细胞有诱导凋亡效应，呈较明显的剂量和时间依赖性。在Stx2e粗毒素和ricin作用下，显微镜下可见Vero细胞出现细胞核固缩断裂成碎块，核膜消失，细胞膜完整且有突起，等细胞凋亡征象；2ug／ml Stx2e粗毒素作用24h的Vero细胞，1ug／ml ricin作用36h的Vero细胞AO／EB染色后可分别见90％和18％细胞的胞核染色质凝集，核固缩成团、碎裂，形成凋亡小体。western blotting表明2ug／ml的Stx2e在作用24h后，Bax表达上调，Caspase-9的表达与对照组相比无显著差别，caspase-3的表达明显增强。1ug／mlricin在作用36h后，Bax表达下调，Caspase-9的表达与对照组相比无显著差别，caspase-3表达增强。 结论：Stx2e和ricin有诱导Vero细胞凋亡的作用。Stx2e诱导Vero细胞凋亡与Bax、Caspase-3有关，可能Stx2e通过Bax加速线粒体中细胞色素C的释放，，提高Caspases的活性。Stx2e诱导的Vero细胞的凋亡与Caspase-9无关。ricin诱导的Vero细胞的凋亡与和Caspase-3有关，与Caspase-9、Bax无关。Stx2e和ricin均为核糖体失活蛋白，二者使核糖体失活的机制相同，但二者使细胞凋亡的机理不同，可能抑制蛋白质合成和细胞凋亡是两个独立的过程。
[Abstract]:Objective: to investigate shiga toxin 鈪

本文编号：1379255