炭疽杆菌噬菌体裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及鉴定

发布时间：2018-01-07 00:33

本文关键词：炭疽杆菌噬菌体裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及鉴定　出处：《生物工程学报》2005年02期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：利用PCR方法扩增炭疽杆菌噬菌体裂解酶 (γlysin)基因 ,克隆至大肠杆菌表达载体pET2 2b中 ,经菌落PCR筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pET2 2b -γlysin构建成功 ,并在EscherichiacoliBL2 1(DE3)中获得了高表达。目的蛋白约占菌体总蛋白的 4 0 % ,5L发酵罐中的产酶水平高达 15g L。菌体经超声破碎 ,制备无细胞抽提液 ,StreamlineSP和SPHP柱层析以及SephacrylS- 10 0凝胶过滤三步纯化 ,得到分子量为 2 7kD单一条带的目的蛋白 ,薄层扫描分析显示其纯度大于 95 %。目的蛋白的收率为 19 1% ,纯化倍数为 35 0。生物活性鉴定重组的γ噬菌体裂解酶具有特异性 :可快速裂解炭疽杆菌 ,比活为 14 0 0u mg左右 ;而对大肠杆菌、枯草杆菌及蜡样芽孢杆菌没有裂解活性。
[Abstract]:The bacteriophage lyase (纬 lysin) gene of Bacillus anthracis was amplified by PCR and cloned into E. coli expression vector pET2 2b. The gene was screened by colony PCR. Sequence analysis and restriction endonuclease identification confirmed that the expression vector pET2 2b- 纬 lysin was successfully constructed. The target protein accounted for about 40% of the total bacterial protein. The enzyme production level in 5L fermenter was as high as 15g / L. Thalli was broken by ultrasonic to produce cell-free extract. StreamlineSP and SPHP column chromatography and Sephacryl S100 gel filtration were used. The target protein with a molecular weight of 27 KD was obtained. TLC analysis showed that the purity of the protein was more than 95 and the yield of the target protein was 19 1%. The specific activity of 纬 phage lyase was about 1400u mg, and the specific activity of 纬 phage lyase was about 1400u mg. The specific activity of 纬 phage lyase was about 1400u mg. However, there was no cleavage activity for Escherichia coli, Bacillus subtilis and Bacillus cereus.
【作者单位】：军事医学科学院生物工程研究所军事医学科学院生物工程研究所吉林大学生命科学学院军事医学科学院生物工程研究所军事医学科学院生物工程研究所军事医学科学院生物工程研究所军事医学科学院生物工程研究所军事医学科学院生物工程研究所
【分类号】：R346
【正文快照】： 炭疽杆菌噬菌体裂解酶 (γlysin)由 2 33个氨基酸残基组成 ,是N 乙酰胞壁酸 L 丙氨酸酰胺酶 ,通过破坏炭疽杆菌细胞壁中的N 乙酰胞壁酸和L 丙氨酸之间的交联而使其裂解[1] 。许多研究表明 ,噬菌体裂解酶具有以下特征 :1 噬菌体裂解酶是dsDNA噬菌体所特有的在病毒复制晚期合

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