HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2018-01-07 03:27

  本文关键词：HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备　出处：《细胞与分子免疫学杂志》2014年02期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性。结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白。结论成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体。
[Abstract]:Objective to prepare the human papilloma virus (HPV) type 16 E7 prokaryotic expression protein and its polyclonal antibody. Methods PCR was used to amplify the HPV16 E7 gene from cervical cancer tissue and cloned into pET21a (+) vector to construct pET21a (+) /HPV16 and E7 recombinant plasmid, sequencing; the recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 (DE3), the isopropyl thio beta -D- thio galactopyranoside (IPTG) expression induced by recombinant protein, was purified by SDS-PAGE and Western and blot analysis identified by Ni-NTA HPV16 E7 affinity; recombinant protein immunized rabbits were purified to prepare polyclonal antibody titer detected by ELISA polyclonal antibody the Western and blot method and immunofluorescence analysis of specific polyclonal antibody. Results HPV16 E7 recombinant protein expression system for expression and purification by prokaryotic; by rabbit immunization can be polyclonal antibody preparation of IgG specificity, potency 1: 30000; the results confirmed that the rabbit polyclonal antibody could specifically recognize HPV16 E7 protein by Western blot assay and immunofluorescence staining. Conclusion the successful HPV16 E7 prokaryotic expression and preparation of HPV16 E7 rabbit polyclonal antibody.

【作者单位】： 温州医科大学分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室;
【基金】：国家自然科学基金(81172463)
【分类号】：R392
【正文快照】： 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是诱发宫颈癌的主要因素之一,根据与宫颈癌的相关性,可将其分为高危型如HPV16、HPV18、HPV33、HPV58等与低危型如HPV6、HPV11等,高危型HPV感染与宫颈癌的发生密切相关,而低危型HPV则可引起生殖器的尖锐湿疣等。尽管不同类型的HPV型

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本文编号：1390794