沙门菌invA基因的克

发布时间：2018-01-07 06:22

  本文关键词：沙门菌invA基因的克隆、表达与表达产物的初步研究　出处：《四川大学》2006年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 沙门菌 侵袭蛋白A pET-30c(+) 基因克隆 蛋白质表达 蛋白质纯化 金属离子亲和层析 免疫血清 ELISA

【摘要】：目的： 通过扩增沙门菌invA基因，构建pET-invA重组子，实现沙门菌invA基因在大肠杆菌中的高效表达，，表达产物经金属离子亲和层析纯化后，免疫CD1小鼠和新西兰大白兔，获得多克隆抗体，并对免疫血清的性质进行初步研究，为后续研究该蛋白的特性和应用奠定基础。 方法： 本研究分为三部分： 1．沙门菌invA基因原核表达重组质粒的构建：根据invA基因序列设计引物，用PCR方法自沙门菌基因组中扩增invA基因目的片段。将该基因与原核表达质粒载体pET-30c(+)连接，构建重组质粒pET-invA，并转化克隆宿主菌E．coli DH5a，利用卡那霉素抗性筛选阳性克隆，质粒小量提取后，用双酶切和基因序列测定鉴定重组质粒。 2．沙门菌InvA融合蛋白的表达、纯化及鉴定：第一部分所得重组质粒pET-invA转化表达宿主菌E．coli BL21(DE3)，IPTG诱导融合蛋白表达，SDS-PAGE分析目的蛋白表达情况；通过镍金属离子亲和层析对InvA融合蛋白进行纯化，SDS-PAGE检测蛋白纯度和分子量，用anti-His-tag单克隆抗体以Western blotting鉴定诱导表达的重组InvA蛋白。 3．InvA融合蛋白的免疫原性研究：使用考马斯亮兰法总蛋白定量测试盒对所得到的纯化产物进行含量测定后，用来免疫CD1小鼠和新西兰大白兔，间接ELISA法测定多克隆抗体的效价，并通过玻片凝集试验观察所制
[Abstract]:Objective:
Through the amplification of Salmonella invA gene, construct pET-invA recombinant, efficient expression of invA gene in Salmonella in Escherichia coli, the expressed product by metal ion affinity chromatography, immune CD1 mice and rabbits to obtain the polyclonal antibody, and the nature of the immune serum were preliminarily studied, and lay the foundation for further research and application characteristics the protein.
Method锛

本文编号：1391351