高迁移率族蛋白B1单克隆抗体的制备及其在竞争ELISA中的应用

发布时间：2018-01-10 17:06

  本文关键词：高迁移率族蛋白B1单克隆抗体的制备及其在竞争ELISA中的应用　出处：《天津医科大学》2007年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 目的制备HMGB1单克隆抗体并建立HMGB1的竞争ELISA测定方法。 方法用bis(sulfosuccinimidyl)suberate制备HMGB1-BSA偶联物(HMGB1-BSA)和HRP标记的HMGB1(HMGB1-HRP)；以完全佐剂乳化的HMGB1-BSA免疫Balb／c小鼠；用50％PEG使小鼠脾细胞与Sp2／0细胞融合；用有限稀释法克隆杂交瘤细胞；用DE52离子交换色层析柱纯化单克隆抗体；用静脉注射链尿菌素法建立大鼠糖尿病模型。 结果在120个孔内，发现17个孔内有分泌HMGB1单克隆抗体的杂交瘤细胞生长。对其中A6-Ⅲ孔内杂交瘤细胞用有限稀释法克隆化，共获得7株分泌HMGB1特异性抗体的杂交瘤细胞株。用其中一株杂交瘤(HMGB1-C1株)制备了纯化HMGB1单克隆抗体。利用HMGB1-BSA和HMGB1-HRP建立的竞争ELISA的测定范围为1～320ng／mL，回收率为97～106％，变异系数为2.6～7.3％。用该竞争ELISA测定正常和糖尿病大鼠血清HMGB1水平发现糖尿病大鼠血清HMGB1水平显著高于正常大鼠。 结论以HMGB1单克隆抗体建立的竞争ELISA有望成为一种具有灵敏度高、特异性强，，重复性好，操作简便和快速的测定方法。
[Abstract]:Objective to prepare HMGB1 monoclonal antibody and establish a competitive ELISA assay for HMGB1. Methods the HMGB1-BSA coupling compound HMGB1-BSA was prepared by bis(sulfosuccinimidyl)suberate. And HRP labeled HMGB1, HMGB1-HRPU; Balb/c mice were immunized with complete adjuvant emulsified HMGB1-BSA. Mouse spleen cells were fused with Sp2/0 cells with 50PEG. The hybridoma cells were cloned by limited dilution method. Monoclonal antibody was purified by DE52 ion exchange chromatography. The diabetic model of rats was established by intravenous streptozotocin. Results the hybridoma cells secreting monoclonal antibodies to HMGB1 were found in 17 of 120 holes, and the hybridoma cells in hole A6- 鈪

本文编号：1406069