活细胞内脊髓灰质炎病毒复制复合体蛋白相互作用研究

发布时间：2018-01-12 22:25

本文关键词：活细胞内脊髓灰质炎病毒复制复合体蛋白相互作用研究　出处：《中国科学院研究生院（武汉病毒研究所）》2007年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 脊髓灰质炎病毒为单股正链RNA病毒。当病毒基因组RNA进入寄主细胞质后，可直接翻译出大分子的多聚蛋白肽，并迅速被水解加工为次级前体P1，P2和P3，然后三个次级前体分别进一步分级剪切成多种具有重要功能的终末产物蛋白。一些病毒蛋白和宿主蛋白以及病毒的RNA一起组成病毒复制复合体，高效迅速地指导病毒核酸的合成。其中P3的剪切产物3AB，3B(VPg)，3D等在病毒的复制复合体的组成及功能行使中具有重要作用：3B(VPg)共价结合于RNA新生链的5’端，起RNA合成起始引发作用；3D是延长RNA新生链的聚合酶；3AB是膜结合蛋白，帮助病毒复制复合体定位于细胞内膜上。研究脊髓灰质炎病毒复制复合体内关键蛋白间相互作用，阐明病毒复制复合体的作用机制，对揭示病毒复制机理以及理解病毒与寄主细胞间相互作用具有重要意义。迄今为止，已经发展了许多蛋白质相互作用的研究方法如：酵母双杂交、免疫共沉淀、SPR等。但这些方法都无法实现蛋白质相互作用的原位、活体、实时研究。荧光共振能量转移技术是一种在活细胞内研究蛋白质相互作用的新技术，可以在活体内原位、无损地可视化蛋白-蛋白间相互作用。本研究利用荧光共振能量转移技术，首次在活细胞内可视化研究了脊髓灰质炎病毒复制复合体内关键蛋白质间的相互作用。本论文主要研究了脊髓灰质炎病毒复制复合体内三种关键蛋白质3AB、VPg、3D在活细胞内的定位和相互作用情况。利用激光共聚焦显微镜和FRET技术分析样品。单独转染实验显示：3AB蛋白主要分布在细胞质区域，且聚集成小的不规则的颗粒；而VPg和3D蛋白主要均匀分布于全细胞。蛋白的共转染实验显示：3AB-VPg这组蛋白在活细胞中可相互作用，且作用区域集中在细胞质，分析结果显示FRET效率平均值为8.3±0.6％(n=44)；同时3AB-3D这组蛋白在活细胞中也可相互作用，且作用区域集中在细胞质，分析结果显示FRET效率平均值为6.1±0.8％(n=46)；而VPg-3D这组蛋白在活细胞中虽然可观察到明显的相互作用，但作用区域分散在整个细胞，没有特别集中的区域，分析结果显示FRET效率平均值为6.8±0.5％(n=51)。可见有3AB蛋白参与的两组相互作用区域集中在细胞质区域，与病毒复制复合体产生位置类似。此外，通过脊髓灰质炎病毒的感染实验，我们发现病毒的感染对3AB-VPg、3AB-3D这两组蛋白间相互作用无明显影响，但是却加强了蛋白VPg和3D间的相互作用，使FRET效率的平均值从6.8±0.5％(n=51)上升为11.1±1.1％(n=43)。借助荧光蛋白标记和荧光共振能量转移技术，本论文研究了脊髓灰质炎病毒复制复合体内三种关键蛋白质3AB、VPg、3D在活细胞内的定位和相互作用。活细胞内蛋白质3AB、VPg、3D相互作用的研究结果证明了它们在脊髓灰质炎病毒的复制复合体形成中的重要作用，，为深入认识病毒复制复合体的形成和作用机制，阐明病毒复制机理提供了重要的数据资料。
[Abstract]:When the viral genome RNA enters the host cytoplasm , the multimeric peptide of the macromolecule can be directly translated , and the three sub - precursors are rapidly hydrolyzed into a plurality of terminal product proteins with important functions . The three sub - precursors are further fractionated and cut into a plurality of terminal product proteins with important functions . In order to clarify the mechanism of interaction between proteins and to understand the mechanism of viral replication and to understand the interaction between viruses and host cells , it is important to study the mechanism of viral replication and to understand the interaction between proteins and host cells . In this paper , the localization and interaction of three key proteins 3AB , VPg and 3D in living cells were studied . In this paper , the localization and interaction of three key proteins 3AB , VPg and 3D in living cells were studied by means of fluorescent protein labeling and fluorescence resonance energy transfer technique .

【学位授予单位】：中国科学院研究生院（武汉病毒研究所）
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R373

【共引文献】